技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于環(huán)境生物工程，具體涉及高效降解環(huán)境中殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥的混合菌劑。

背景技術(shù)

我國是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)藥的生產(chǎn)量和使用量均呈逐年遞加之勢。農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的大量應(yīng)用，對于防治農(nóng)作物病蟲害方面起到了極其重要的作用，為糧食豐收提供了可靠的保證。但是，長期大量地使用農(nóng)藥使得環(huán)境中的農(nóng)藥污染日益嚴(yán)重，危及人們身體健康、食品安全及其他環(huán)境問題。有機(jī)磷類農(nóng)藥得到長期、廣泛、大量的應(yīng)用，其中毒死蜱是世界上使用量最大的農(nóng)藥之一。在我國，毒死蜱是甲胺磷和甲基對硫磷等高毒農(nóng)藥的新型高效、低毒替代品種，生產(chǎn)量和使用量很大。雖然毒死蜱是低毒的農(nóng)藥，但是使用量之大、使用范圍之廣，已對我國大部分地區(qū)的土壤、水體造成了嚴(yán)重的污染。存儲(chǔ)在土壤、水體中的毒死蜱不僅對動(dòng)植物、微生物等生命體產(chǎn)生毒害作用，而且，毒死蜱還直接和間接地影響了人類的健康，所以，需要研發(fā)高效清除毒死蜱等有機(jī)磷殘留污染的生態(tài)修復(fù)技術(shù)，為農(nóng)業(yè)安全生產(chǎn)和環(huán)境安全提供技術(shù)支持和參考。

國內(nèi)外一般采用的技術(shù)，是從長期受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的環(huán)境中篩選出降解殘留農(nóng)藥的高效菌株，制成微生物制劑或酶制劑，將該類菌劑應(yīng)用到受農(nóng)藥污染的土壤和水體中，降解殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥，實(shí)現(xiàn)生物修復(fù)。該類技術(shù)和菌劑是一種可靠低成本的措施。

在有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的生物修復(fù)領(lǐng)域中存在以下主要問題。①、不同環(huán)境中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的濃度存在差異，不同實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的菌株的降解能力也存在差異，有的菌株對10mg/L～50?mg/L低濃度的有機(jī)磷殘留降解較快，有的菌株對50mg/L～100?mg/L的較高濃度的有機(jī)磷殘留降解較快，使用這類單一菌株的制劑，不易快速清除環(huán)境中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。②、現(xiàn)有的技術(shù)中缺乏快速降解高于100?mg/L有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的高效降解菌株。③、一般采用的菌株降解速度較慢，需要7天～30天以上的處理時(shí)間才能發(fā)揮充分降解效果。

發(fā)明內(nèi)容

為了實(shí)現(xiàn)快速降解環(huán)境中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，本發(fā)明提供一種高效降解環(huán)境有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的多菌株組合物，發(fā)揮不同微生物菌株活性，高效降解環(huán)境有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，實(shí)現(xiàn)污染的生物修復(fù)。

具體操作方法如下：

高效降解環(huán)境有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的多菌株組合物包括下列A菌株、B菌株和C菌株：

（1）、A菌株為玫瑰紅紅球菌（Rhodococcus?rhodochrous）R-D3菌株，可在24小時(shí)～48小時(shí)內(nèi)降解10mg/L～20mg/L的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留；

（2）、B菌株為微嗜酸寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas?acidaminiphila）G1菌株，可在24小時(shí)～48小時(shí)內(nèi)降解50mg/L～100mg/L的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留；

（3）、C菌株為臺灣嗜銅菌（Cupriavidus?taiwanensis）X1菌株，可在24小時(shí)～48小時(shí)內(nèi)降解100mg/L～300mg/L的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留；

分別將三種菌株接種到LB液體培養(yǎng)基中，30℃～37℃、120轉(zhuǎn)/分鐘震蕩培養(yǎng)24小時(shí)～48小時(shí)，制得細(xì)胞濃度5.0×10⁸/mL～1.0×10¹⁰/mL的A菌液、5.0×10⁸/mL～1.0×10¹⁰/mL的B菌液、5.0×10⁸/mL～1.0×10¹⁰/mL的C菌液；

A菌液、B菌液、C菌液按體積配比A：B：C為1～2：1～2：1～2混合均勻，得到高效降解環(huán)境有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的多菌株組合物。

本發(fā)明的多菌株組合物所能降解的有機(jī)磷農(nóng)藥包括：毒死蜱、或甲基對硫磷、或馬拉硫磷、或殺螟硫磷。

將多菌株組合物釋放到受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的環(huán)境中，發(fā)揮多菌株組合物降解有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的生理功能，在2～4天的時(shí)間內(nèi)，將殘留的農(nóng)藥降解90％以上。

本發(fā)明的多菌株組合物可應(yīng)用的環(huán)境包括：農(nóng)田、或池塘、或果園、或草場、或河流、或人造水體。

本發(fā)明的多菌株組合物可以制成懸浮細(xì)胞多菌株組合物，具體操作方法如下：分別取100mL的A菌液、B菌液、C菌液，采取離心法獲取菌液中的細(xì)胞，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分鐘～6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘～30分鐘；棄上清液，用0.85％的氯化鈉溶液100mL將離心沉淀的細(xì)胞懸浮，分別制得A菌株懸浮細(xì)胞、B菌株懸浮細(xì)胞、C菌株懸浮細(xì)胞；將A菌株懸浮細(xì)胞、B菌株懸浮細(xì)胞、C菌株懸浮細(xì)胞按照體積配比為A：B：C為1～2：1～2：1～2混合均勻，制得懸浮細(xì)胞多菌株組合物。