1.梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，其特征在于設有DNA提取試劑瓶、耐熱DNA聚合酶瓶、PCR反應液瓶、標準品瓶、質控品瓶和包裝盒；所述DNA提取試劑瓶設有蛋白酶K瓶、裂解液瓶、無水乙醇瓶、抑制物去除液瓶、第1清洗緩沖液瓶、洗脫液瓶、第2清洗緩沖液瓶和含收集管的離心柱；所述標準品瓶設有6個含5個靶基因的標準品質粒瓶，所述5個靶基因為polA基因、TPN47基因、tmpA基因、TpF-1基因和bmp基因5個梅毒高特異性基因；所述質控品瓶設有陰性質控品瓶和陽性質控品瓶；所述6個含5個靶基因的標準品質粒瓶、PCR反應液瓶、含收集管的離心柱、陰性質控品瓶、陽性質控品瓶、Tag酶瓶、蛋白酶K瓶、裂解液瓶、無水乙醇瓶、抑制物去除液瓶、第1清洗緩沖液瓶、洗脫液瓶和第2清洗緩沖液均布在外包裝盒內。

2.如權利要求1所述的梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，其特征在于所述陰性質控品為不含梅毒螺旋體DNA的樣品，陽性質控品為含梅毒螺旋體DNA的樣品。

3.如權利要求1所述的梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，其特征在于所述6個含5個靶基因的標準品質粒的濃度分別為1.0×10²copies/mL、1.0×10³copies/mL、1.0×10⁴copies/mL、1.0×10⁵copies/mL、1.0×10⁶copies/mL和1.0×10⁷copies/mL，共6個濃度。

4.如權利要求1所述的梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，其特征在于所述PCR反應液的成份含有PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs和5對引物探針組成的混合物。

5.如權利要求1所述的梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，其特征在于所述耐熱DNA聚合酶具有3′→5′DNA聚合酶活性、5′→3′DNA外切核酸酶活性和可耐受高溫的聚合酶；所述耐熱DNA聚合酶是半衰期＞45min的高溫聚合酶。

6.如權利要求1所述的梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)靶基因篩選，具體方法如下：

從基因庫(GENBANK)中篩選梅毒螺旋體靶基因，包括polA基因、TPN47基因、tmpA基因、TpF-1基因和bmp基因5個梅毒特異性基因，5對梅毒高特異性基因探針和引物的設計采用PCR引物探針設計軟件primer?premier?5.0、Oligo?6.0、TM?Utility?vl.3、Clustal?X等設計軟件輔助完成，然后通過Basic?Local?Alignment?Search?Tool(BLAST)進行同源性比對以保證其特異性，合成的引物和探針用TE(10mM?Tri-HCl，pH5.0，0.1mM?TA)溶解，使用ND-1000UV-VIS波長紫外/可見光掃描分光光度計進行濃度測定后，保存；

2)多靶基因標準品質粒的構建，具體方法如下：

以硅膠膜-離心柱法提取梅毒螺旋體Nichols株DNA作為模板，采用步驟1)中的5個靶基因的引物，進行PCR擴增，具體過程如下：將擴增產物經過回收及純化后，在微量離心管中配制DNA溶液，后加入5μL等量的Solution?I，16℃反應30min，與pMD18-T載體連接將連接產物轉化至DH5α中，冰中放置30min，42℃加熱45s后，再在冰中放置1min，加入LB培養基，37℃震蕩培養60min后，在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB瓊脂平板培養基上培養，形成單菌落，挑選白色菌落，進行增殖培養，提取質粒并對其進行PCR，Xab?I和Sal?I雙酶切及測序鑒定后，將構建好的質粒進行單酶切線性化處理，再用紫外分光光度計定量并-20℃保存作為Real-time?PCR的標準品；

3)多靶基因檢測試劑標準曲線制作，其具體方法如下：

包含靶基因的陽性克隆大腸桿菌在含Amp?LB肉湯增菌，提取質粒，取10μL質粒用雙蒸水稀釋100倍，260nm，280nm比色，純度＝A₂₆₀/A₂₈₀，濃度＝A₂₆₀×50×2×100×10^-6×6.02×10²³/(2806×324.5×2)copies/mL，根據質粒濃度，進行梯度稀釋，以每個濃度標準品作模板進行熒光定量反應，確定線性范圍；

4)制備PCR反應液，其具體方法如下：

采用PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs、5對引物探針的混合物共同組成PCR反應液；

5)制備耐熱DNA聚合酶，其具體方法如下：

大腸桿菌用異丙基硫代-β-D半乳糖苷進行誘導表達，誘導后的菌懸液菌懸液100ml經5000r/min，4℃離心5min，以10ml緩沖液I重懸菌液，4℃，5000r/min，離心5min，細菌沉淀再懸于5ml緩沖液I中，加入溶菌酶使濃度達5mg/ml，37℃水浴20min；加入5ml緩沖液II，75℃水浴45min，4℃，15000r/min離心10min；上清加入硫酸銨使達30％，4℃，1500r/min離心10min，沉淀溶于1ml緩沖液III中，并對緩沖液III在4℃條件下透析，每6h換液1次共4次，離心除去不溶物后，-20℃凍存；

6)建立樣品處理方法，其具體方法如下：

使用梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑檢測梅毒螺旋體的樣本，采用硅膠膜-離心柱法提取模板DNA；

7)制備質控品，其具體方法如下：

制備陰性質控品：選擇經過臨床確認為陰性的臨床標本；

制備陽性質控品：選擇經過臨床確認為陽性的臨床標本經稀釋獲得陽性質控品；

8)制備梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒，將DNA提取試劑、耐熱DNA聚合酶、PCR反應液、標準品和質控品共同組成梅毒螺旋體實時熒光定量PCR多靶檢測試劑盒。