技術領域

本發明屬于分子生物學的領域，具體是一種快速、特異性檢測ApoE4基因型的試劑盒及其應用。

背景技術

人類的載脂蛋白E(Apolipoprotein?E，ApoE)由19q11.2所編碼，其基因常見有3種表型，即ε2、ε3和ε4等位基因所編碼的3種載脂蛋白E2、E3和E4，構成6種不同的基因型。包括3種純合子(ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4)和3種雜合子(ε2/ε3、ε3/ε4、ε2/ε4)。等位基因的改變造成ApoE4對LDL受體親和力更大，即ApoE4＞ApoE3＞ApoE2，從而影響脂蛋白代謝及血脂水平，ApoE4/4基因型已作為心腦血管病發病的獨立危險因素。由于ApoE基因與胰島素抵抗(IR)、肥胖等相關，因此檢測ApoE基因型對醫學分子流行病的研究有重要意義。

目前，醫學分子流行病檢測ApoE4基因型的方法主要是PCR-RFLP，首先從外周血抽提基因組DNA，選用ApoE外顯子4側翼序列設計引物進行ApoE4的擴增，Hha?I進行酶切，然后對酶切產物進行垂直非變性PAGE進行分離，以確定其基因型。但是此種方法采樣要求高，檢測繁瑣，不利于流行病學普查的使用，且創傷性的抽血獲得基因組DNA并非被每個個體所接受，尤其是正常對照組的個體。ApoE外顯子4序列GC含量很高，不易擴增，對基因型的檢測結果有很大影響，有必要對擴增條件進行優化。因此，建立一種簡單易行、無創傷的抽提基因組DNA，高效特異性擴增ApoE?4基因片段，快速檢測ApoE4基因型的方法對ApoE4基因型相關的分子流行病學和預防醫學的研究有重要的意義。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種判定時間短，準確性高的特異性檢測ApoE4基因型的試劑盒及其應用。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種特異檢測ApoE4基因型的試劑盒，其特征在于，該試劑盒由以下試劑組成：4wt％蔗糖水、10mmol/L的NaOH溶液、1mol/L的三羥甲基氨基甲烷(Tris)-HCl(pH?7.5)溶液、二甲基亞砜(DMSO)、試劑I、試劑II、限制性核酸(Hha?I)內切酶、10×M?Buffer。

所述的試劑盒由表1所述配比的試劑組成，

表1