[發明專利]梭菌神經毒素的定量檢測方法無效
| 申請號: | 201080052392.6 | 申請日: | 2010-11-16 |
| 公開(公告)號: | CN102639054A | 公開(公告)日: | 2012-08-15 |
| 發明(設計)人: | 杰德·J·曼德;哈羅德·泰勒;馬丁·韋;卡爾·海因茨·艾斯勒 | 申請(專利權)人: | 梅斯制藥兩合股份有限公司 |
| 主分類號: | A61B5/0488 | 分類號: | A61B5/0488;A61B5/11;G01N33/50;G01N33/94 |
| 代理公司: | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人: | 張晶;王朋飛 |
| 地址: | 德國法*** | 國省代碼: | 德國;DE |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 神經 毒素 定量 檢測 方法 | ||
1.測定梭菌神經毒素對細胞培養物誘導的效果的方法,包括:
(a)使細胞培養物與含有所述梭菌神經毒素的樣品接觸;
(c)測定所述梭菌神經毒素對所述細胞培養物誘導的效果;
其中步驟(c)在不含所述樣品的情況下進行;以及
在步驟(c)所述測定之前,且在步驟(a)所述接觸之后,使所述細胞培養物與不含梭菌毒素的水介質接觸0.5-100h。
2.根據權利要求1所述的方法,參照第二樣品中梭菌神經毒素的已知濃度,確定第一樣品中梭菌神經毒素的未知濃度,該方法包括:
(a)使細胞培養物與所述第二樣品接觸;
(c)測定所述神經毒素對所述細胞培養物誘導的第二效果;
(d)以不同濃度的所述梭菌神經毒素重復步驟(a)-(c);
(e)記錄步驟(d)中在對應濃度下測得的第二效果,從而記錄第二數據集;
(f)使細胞培養物與所述第一樣品接觸;
(h)測定對所述細胞培養物誘導的第一效果;
(k)確認出所述第一和第二效果相同的濃度;
(l)(k)中所述濃度等于所述未知濃度;
其中步驟(c)和/或步驟(h)在不含所述第二和/或第一樣品的情況下進行;以及
在步驟(c)或步驟(h)或者步驟(c)和步驟(h)測定之前,且在步驟(a)或步驟(f)或者步驟(a)和步驟(f)所述接觸之后,使所述細胞培養物與不含梭菌毒素的水介質接觸0.5-100h。
3.根據權利要求1所述的方法,參照第二樣品中梭菌神經毒素的效價,確定第一樣品中梭菌神經毒素的相對效價,該方法包括:
(a)使細胞培養物與所述第二樣品接觸;
(c)測定所述神經毒素對所述細胞培養物誘導的第二效果;
(d)以不同濃度的所述梭菌神經毒素重復步驟(a)-(c);
(e)記錄步驟(d)中在對應濃度下測得的第二效果,從而記錄第二數據集;
(f)使細胞培養物與所述第一樣品接觸;
(h)測定對所述細胞培養物誘導的第一效果;
(i)以不同濃度的所述梭菌神經毒素重復步驟(f)-(h);
(j)記錄步驟(i)中在對應濃度下測得的第一效果,從而記錄第一數據集;
其中步驟(c)和/或步驟(h)在不含所述第二和/或第一樣品的情況下進行;以及
在步驟(c)或步驟(h)或者步驟(c)和步驟(h)測定之前,且在步驟(a)或步驟(f)或者步驟(a)和步驟(f)所述接觸之后,使所述細胞培養物與不含梭菌毒素的水介質接觸0.5-100h。
4.根據權利要求3所述的方法,進一步包括步驟(m)和(n):
(m)從最佳擬合于第一和第二數據集的濃度范圍中選擇所述不同濃度;
(n)根據統計學檢驗確定所述最佳擬合,其包括以下子步驟(α)-(δ):
(α)以擬合曲線表示出步驟(e)中獲得的第二數據集的數值范圍;
(β)以擬合曲線表示出步驟(j)中獲得的第一數據集的數值范圍;
(γ)分別線性化所述擬合曲線;
(δ)平行化所述線性化的擬合曲線。
5.根據權利要求4所述的方法,其中所述統計學檢驗為F-檢驗,或χ2-檢驗,或t-檢驗。
6.根據權利要求4或5所述的方法,其中每個子步驟(α)-(δ)的誤拒絕概率為≤5(以%表示)。
7.根據權利要求3-6任一項所述的方法,進一步包括步驟(ε):
(ε)根據所述線性化的擬合曲線和所述平行化的擬合曲線彼此的相對位移,計算第一樣品相對于第二樣品的相對效價。
8.根據權利要求1-7任一項所述的方法,其中所述效果是蛋白從SNARE復合體的裂解。
9.根據權利要求8所述的方法,其中所述蛋白為SNAP25。
10.根據權利要求1-9任一項所述的方法,其中在步驟(c)或步驟(h)或者步驟(c)和步驟(h)所述測定之前,使所述細胞培養物與所述梭菌毒素接觸5-45h,或15-40h,或25-35h。
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