[發明專利]小型化Endoglin抗體與阿霉素的偶聯物及其制備方法有效
| 申請號: | 201010624459.0 | 申請日: | 2010-12-29 |
| 公開(公告)號: | CN102258789A | 公開(公告)日: | 2011-11-30 |
| 發明(設計)人: | 王華;譚光宏;黃風迎;周松林;黃用豪;郭峻莉;趙煥閣;林映瑩 | 申請(專利權)人: | 海南醫學院 |
| 主分類號: | A61K47/48 | 分類號: | A61K47/48;A61K31/704;A61P35/00 |
| 代理公司: | 海口興南知識產權事務有限公司 46002 | 代理人: | 戴巨龍 |
| 地址: | 海南省*** | 國省代碼: | 海南;66 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 小型化 endoglin 抗體 阿霉素 偶聯物 及其 制備 方法 | ||
1.小型化Endoglin抗體與阿霉素的偶聯物,其特征在于:偶聯物Fab-ADM是由MBS作為交聯劑,MBS首先與一含有-NH2的分子即ADM反應并穩定結合為活性的中間產物,然后再與一含有-S-的分子即為經胃蛋白酶消化、DTT還原的抗體片段Fab反應得到終產物,即偶聯物;Fab與ADM的分子比為1∶2。
2.如權利要求1的小型化Endoglin抗體與阿霉素的偶聯物的制備方法:包括以下步驟:
(1)、選用MBS作為交聯劑備用;
(2)、阿霉素的MBS修飾:
調整阿霉素濃度為10mg/ml,MBS濃度為2mg/ml,以MBS與阿霉素摩爾比為10∶1調整反映體系,于室溫反應30min后,立即與巰基化的單抗混合;
(3)、Endoglin抗體片段Fab的巰基化
經飽和硫酸銨沉淀及丙烯葡聚糖凝膠S-200HR純化得到的單抗分子,與胃蛋白酶反應時的分子比約為20∶1,37℃,反應3-6小時,反應體系pH值為4.5;反應結束后,加入2M的Tris,pH8.0終止反應;調整經丙烯葡聚糖凝膠S-200HR凝膠柱純化所得的F(ab′)2濃度為10mg/ml,加入DTT還原,其終濃度為50mM,室溫反應30min,脫鹽后立即與步驟(2)中的MBS修飾的阿霉素偶聯;
(4)、偶聯物的制備
MBS修飾的阿霉素與巰基化單抗的摩爾比為約15∶1,室溫反應18h;偶聯物過丙烯葡聚糖凝膠S-200HR凝膠柱純化并超濾濃縮,于吸光度280nm處測定蛋白濃度。
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