[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010616820.5 | 申請日: | 2010-12-30 |
| 公開(公告)號: | CN102154104A | 公開(公告)日: | 2011-08-17 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 徐慧;楊偉超;王若超;周麗沙;韓斯琴;孔雙;張大鵬;紀(jì)悅;周凱;趙華;季光輝;金玉坤 | 申請(專利權(quán))人: | 中國科學(xué)院沈陽應(yīng)用生態(tài)研究所;東北制藥集團(tuán)股份有限公司 |
| 主分類號: | C12N1/00 | 分類號: | C12N1/00;G01N21/31 |
| 代理公司: | 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002 | 代理人: | 張志偉 |
| 地址: | 110164 遼寧省*** | 國省代碼: | 遼寧;21 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 轉(zhuǎn)化 右旋 磷霉素 生物 催化 菌株 篩選 方法 | ||
1.一種轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:首先,制備左旋磷霉素敏感菌株的菌懸液,使其細(xì)菌濃度為108-1010個細(xì)菌/ml;然后,將左旋磷霉素敏感菌株的菌懸液加入經(jīng)0.45μm孔徑濾膜過濾除菌的待篩選催化菌株的無菌發(fā)酵液中,在培養(yǎng)初始時刻和培養(yǎng)一段時間后,取發(fā)酵液于600nm分光光度計中測定其吸光度;選取培養(yǎng)一段時間后吸光度增加幅度最低或較低者,進(jìn)一步驗證其原始待篩選菌株是否具有轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素能力。
2.按照權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備左旋磷霉素敏感菌株的菌懸液,使其細(xì)菌濃度為108-1010個細(xì)菌/ml;將可能把右旋磷霉素轉(zhuǎn)化為左旋磷霉素的待篩選催化菌株接種于催化培養(yǎng)基中,經(jīng)搖瓶培養(yǎng)20-120小時后,吸取發(fā)酵液,通過0.45μm孔徑濾膜過濾除去發(fā)酵液中的細(xì)菌,制成待篩選菌株的無菌發(fā)酵液。
3.按照權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基組成為:按重量百分?jǐn)?shù)計,牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,NaCl?0.2%,pH?7.5,余量為水;121℃濕熱滅菌20min。
4.按照權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:左旋磷霉素敏感菌株為大腸桿菌或金黃色葡萄球菌。
5.按照權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是,待篩選催化菌株的催化培養(yǎng)基組成為:按重量百分?jǐn)?shù)計,右旋磷霉素0.5-3.0%,(NH4)25O40.5-1.0%,NaCl?0.2%,KCl?0.1%,MgSO4·7H2O0.01-0.02%,F(xiàn)eSO4·7H2O?0.01-0.03%,KH2PO40.05-0.15%,余量為水;pH?7.5,121℃濕熱滅菌20min,恒溫震蕩培養(yǎng),培養(yǎng)溫度28-37℃、搖床轉(zhuǎn)速150-250rpm,培養(yǎng)時間3-7天。
6.按照權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:把敏感菌株的菌懸液與待篩選菌株的無菌發(fā)酵液相混合,使混合液中敏感菌終濃度為102-104個細(xì)菌/ml,把混合液于37℃溫度下培養(yǎng)8-48小時,取該培養(yǎng)液和培養(yǎng)初始時刻的混合液于600nm分光光度計中測定其吸光度,獲得培養(yǎng)8-48小時培養(yǎng)液與培養(yǎng)初始時刻混合液的吸光度差值,篩選出經(jīng)培養(yǎng)一段時間吸光度不增加或增加幅度較低者,取其原始待篩選催化菌株,進(jìn)一步驗證其轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素能力。
7.按照權(quán)利要求6所述的轉(zhuǎn)化右旋磷霉素為左旋磷霉素生物催化菌株的篩選方法,其特征是:左旋磷霉素敏感菌株的菌懸液與待篩選菌株的無菌發(fā)酵液相混合時,混合液中視敏感菌生長狀況添加牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,添加重量比例為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基∶混合液=1∶100-1∶5。
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