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[發明專利]一種檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及其診斷試劑盒有效

專利信息
申請號: 201010509924.6 申請日: 2010-10-15
公開(公告)號: CN101942523A 公開(公告)日: 2011-01-12
發明(設計)人: 邵棠 申請(專利權)人: 邵棠
主分類號: C12Q1/68 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211 代理人: 王函
地址: 江蘇省無錫市錫山經濟開發區芙*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 檢測 pca3 基因 psa 芯片 及其 診斷 試劑盒
【權利要求書】:

1.一種檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)設計一種羧基微球Beads,該微球上共價結合針對PCA3基因或PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針;或者設計包含兩種不同熒光編碼的羧基微球Beads,每種微球上分別共價結合針對PCA3基因和PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針;

(2)針對PCA3基因和/或PSA基因的mRNA,分別設計上下游引物,通過逆轉錄PCR擴增出相應的產物;

(3)含有特異性核酸探針的微球與PCA3基因和/或PSA基因的mRNA的逆轉錄擴增產物混合雜交,加入鏈霉親和素-藻紅蛋白Streptavidin-PE后,通過液相芯片xMAP方法檢測熒光信號;

(4)將檢測到的熒光信號與內參基因的熒光信號進行比較,從而確定檢測樣品中是否存在前列腺疾病相關的基因PCA3基因和/或PSA基因,及其在樣品中的表達狀況,同時亦可計算出PCA3基因/PSA基因的比值。

2.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法,其特征在于,步驟(1)中,所述的微球是平均直徑為5.6μm,結合了不同熒光染料的聚苯烯微球,即色彩編碼微球Color-coded?beads。

3.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法,其特征在于,步驟(1)中,所述的共價結合于微球上的針對PCA3基因的mRNA、PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針,包括如下序列,其中5’端含氨基修飾:

針對PCA3基因的mRNA:

探針(1):5’-AminolinkerC12?ATTTCTCACCTCTGTATCATC-3’,如SEQ?ID?NO.1所示;

探針(2)、(3)、(5)、(6)同探針(1),如SEQ?ID?NO.1所示;

探針(4):5’-AminolinkerC12?CTCACCTCTGTATCATCAG-3’,如SEQ?ID?NO.2所示;

探針(7):5’-AminolinkerC12?ATCTCTGTGCTTCCTTTTGT-3’,如SEQ?ID?NO.3所示;

探針(8)同探針(7),如SEQ?ID?NO.3所示;

探針(9):5’-AminolinkerC12?CAAATCTGTAATCCCGTTCA-3’,如SEQ?ID?NO.4所示;

探針(10):5’-AminolinkerC12?TATGTGTCAAGAGGAGAGCC-3’,如SEQ?ID?NO.5所示;

或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列;

或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85%的序列;

或者與上述序列的堿基互補序列;

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合;

針對PSA基因的mRNA:

探針A:5’-AminolinkerC12?CAGAATCACCCGAGCAGGTG-3’,如SEQ?ID?NO.6所示;

探針B:5’-AminolinkerC12?GGGGTCAAGAACTCCTCTGG-3’,如SEQ?ID?NO.7所示;

探針C:5’-AminolinkerC12?CACGCTTTTGTTCCTGATGC-3’,如SEQ?ID?NO.8所示;

探針D同探針A,如SEQ?ID?NO.6所示;

探針E同探針B,如SEQ?ID?NO.7所示;

或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列;

或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85%的序列;

或者與上述序列的堿基互補序列;

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。

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