技術領域

本發明涉及基因工程抗體技術，特別是涉及一種人源抗狂犬病毒 糖蛋白中和性抗體；本發明還涉及該抗體在制備預防或治療狂犬病的 藥物中的應用。

背景技術

狂犬病是由狂犬病毒引起的世界性人獸共患病，一旦發病100％ 死亡。目前世界上87個國家有狂犬病報道，每年約有5萬多人死于 狂犬病(Knobel?DL，et?al.2005)。狂犬病暴露后預防是防治狂犬病 的主要措施。對于嚴重暴露的人，世界衛生組織(World?Health Organization，WHO)建議采用狂犬疫苗注射結合抗狂犬病毒免疫球蛋 白(rabies?immune?globulin，RIG)的方法。目前使用的兩類RIG為人 抗狂犬病毒免疫球蛋白(human?rabies?immune?globulin，HRIG)和馬 抗狂犬病毒免疫球蛋白(Equine?rabies?immune?globulin，ERIG)。由 于ERIG副反應比較嚴重，而且對某些疫苗的抗體反應有抑制，而 HRIG價格昂貴，供應量有限并且有潛在的病原威脅。因此制備高效、 價廉、副反應小的被動免疫制劑是我們的目標。

含有特異性抗體的人源或動物血清免疫球蛋白用以預防和治療 傳染病已歷史悠久。單克隆抗體的體外抗病毒中和活性和體內保護肌 體抵抗病毒攻擊已獲得許多實驗證明，如鼠抗甲肝病毒、漢坦病毒、 麻疹病毒、RSV病毒、CMV病毒等中和性單克隆抗體可以在體內100 ％保護動物免受病毒攻擊。以抗原免疫動物獲得多抗血清的途徑一直 是獲得抗體的經典方法，但缺乏特異性和均一性。繼而建立的B淋巴 細胞雜交瘤技術使得眾多科學家通過細胞工程可以在體外定向地制 備各種單克隆抗體(monoclonal?antibody，McAb)，其特異性強，性 質均一，易于大量生產。然而McAb多為鼠源性，鼠源McAb的異 源性反應極大地限制了McAb作為治療制劑在人體的應用。免疫球 蛋白(Vaccinia?immune?globulin，VIG)作為抗體成分主要來自捐獻者 (恢復期病人)免疫血清，從獲得陽性血清到通過安全性檢測均需花 費大量的人力和財力，這就使其大量制備受到限制，同時由于來源于 血清所以容易發生血源性傳播疾病的感染。因此使用人源基因工程產 品替代血制品則可克服這些缺陷，而人源基因工程抗體研究的不斷深 入，給這一領域的生物制品發展帶來了新的希望和廣闊前景。通過抗 體分子基因水平的重組可獲得多種多樣的特異性鼠源及人源抗體，使 對單克隆抗體的研究有了突破性進展并越來越顯示出其重要意義及 實際運用前景。人源抗狂犬病毒單克隆抗體的研制和噬菌體抗體庫技 術的產生為解決被動免疫制劑問題提供了新的思路。狂犬單克隆抗體 CR57和CR4098做成的單克隆抗體雞尾酒中和了26種典型的街毒 株。對動物的保護性實驗表明，利用單克隆抗體雞尾酒進行治療具有 可行性和優越性(Goudsmit?J，et?al.2006)。

80年代末90年代初興起的噬菌體抗體基因庫技術興起和整個基 因工程抗體技術研究領域的發展，使當今世界人源或基因工程抗體的 開發研究取得很大進展并已由基礎研究階段步入實質性應用研究和 開發階段。人源抗病毒基因工程抗體，尤其是人源全抗體的研究成功， 給各種病毒性傳染病的特異性預防和治療帶來了新的希望，在抗病毒 感染生物藥領域逐漸形成了一類新的抗病毒藥，即所謂的抗體藥 (Antibody?Drug)。如同當初血源性疫苗向基因工程疫苗的轉變，現 在也急需用基因工程抗體替代血源性VIG，如通過嵌合抗體技術 (Boulianne，G.L.et?al.，1984；Morrison，S.L.et?al.，1984)、人源化抗體 技術(Jones，P.T.et?al.，1986)、攜帶人單抗的轉基因小鼠技術 (Green，L.L.et?al.，1994)、異體雜交瘤技術(James，K.et?al.，1987)、噬菌 體表面展示技術(Barbas，C.F.et?al.，1991)等產生人源化抗體，現已成 為國內外研究的重大方向，并正在逐步走向成功。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種人源抗狂犬病毒糖蛋白中和 性抗體及其活性片段。

本發明的第二個目的在于提供編碼上述抗體或其活性片段的基 因。

本發明的第三個目的在于提供上述抗體及其活性片段在制備預 防或治療狂犬病藥物或診斷試劑中的應用。