[發明專利]造血祖細胞的制備方法及其專用培養基有效
| 申請號: | 201010135099.8 | 申請日: | 2010-03-26 |
| 公開(公告)號: | CN102206610A | 公開(公告)日: | 2011-10-05 |
| 發明(設計)人: | 鄧宏魁;于晨 | 申請(專利權)人: | 北京大學;北京華源博創科技有限公司 |
| 主分類號: | C12N5/0735 | 分類號: | C12N5/0735;C12Q1/02 |
| 代理公司: | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人: | 關暢;任鳳華 |
| 地址: | 100871 北京市海淀區*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 造血 細胞 制備 方法 及其 專用 培養基 | ||
1.誘導人胚胎干細胞分化為造血祖細胞的培養基,由分化培養基I,分化培養基II和分化培養基III組成;分化培養基I為分化培養基I-1或分化培養基I-2;分化培養基II為分化培養基II-1或分化培養基II-2;分化培養基III為分化培養基III-1或分化培養基III-2;
所述分化培養基I-1為在第一階段分化培養基中添加骨形態發生原蛋白-4得到的培養基;所述分化培養基I-1中的所述骨形態發生原蛋白-4終濃度為10-100ng/ml;
所述分化培養基I-2為在第一階段分化培養基中添加骨形態發生原蛋白-4和Wnt3a得到的培養基;所述分化培養基I-2中的所述骨形態發生原蛋白-4的終濃度為10-100ng/ml,所述Wnt3a的終濃度為50-150ng/ml;
所述分化培養基II-1為在第二階段分化培養基中添加血管內皮細胞生長因子得到的培養基;所述分化培養基II-1中的所述血管內皮細胞生長因子的終濃度為50-150ng/ml;
所述分化培養基II-2為在第二階段分化培養基中添加血管內皮細胞生長因子和堿性成纖維細胞生長因子得到的培養基;所述分化培養基II-2中的所述血管內皮細胞生長因子的終濃度為50-150ng/ml,所述堿性成纖維細胞生長因子的終濃度為50-150ng/ml;
所述分化培養基III-1為第三階段分化培養基;所述分化培養基III-2為在第三階段分化培養基中添加全反式視黃酸得到的培養基,所述分化培養基III-2中的所述全反式視黃酸的終濃度為1-5μM;
所述第一階段分化培養基為在用于培養哺乳動物細胞的基礎細胞培養基上添加牛血清白蛋白得到的培養基;所述第一階段分化培養基中的所述牛血清白蛋白的終濃度為0.1-1mg/ml;
所述第二階段分化培養基為在所述第一階段分化培養基上添加胰島素-轉鐵蛋白-硒鹽、維生素C酸和硫代甘油得到的培養基;所述第二階段分化培養基中的所述胰島素-轉鐵蛋白-硒鹽的終濃度為0.5-1.5%(體積百分含量),所述維生素C酸的終濃度為0.1-1mmol/l,所述硫代甘油的終濃度為0.1-1mmol/l;
所述第三階段分化培養基為將所述第二階段分化培養基中的胰島素-轉鐵蛋白-硒鹽替換成B27得到的培養基,所述第三階段分化培養基中的所述B27的終濃度為0.5-1.5%(體積百分含量)。
2.根據權利要求1所述的培養基,其特征在于:
所述分化培養基I-1和I-2中的所述骨形態發生原蛋白-4的終濃度均為10、20、40、50、60、80或100ng/ml,所述分化培養基I-2中的所述Wnt3a的終濃度為50、60、80、100、120或150ng/ml;
所述分化培養基II-1和II-2中的所述血管內皮細胞生長因子的終濃度均為50、60、80、100、120或150ng/ml,所述分化培養基II-2中的所述堿性成纖維細胞生長因子的終濃度為50、60、80、100、120或150ng/ml;
所述分化培養基III-2中的所述全反式視黃酸的終濃度為1、1.2、1.5、2、2.5、3、4或5μM;
所述第一階段分化培養基中的牛血清白蛋白的終濃度為0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8或1mg/ml;
所述第二分化培養基中的所述維生素C酸的終濃度為0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8或1mmol/l,所述硫代甘油的終濃度為0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8或1mmol/l,所述胰島素-轉鐵蛋白-硒鹽的終濃度為0.5%、0.7%、0.9%、1%、1.2%、1.4%或1.5%;
所述第三階段分化培養基中的所述B27的終濃度為0.5%、0.7%、0.9%、1%、1.2%、1.4%或1.5%。
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