[發明專利]一種聯合快速檢測流行性乙型腦炎病毒、登革病毒和西尼羅病毒試劑盒及其檢測方法無效
| 申請號: | 200910047186.5 | 申請日: | 2009-03-06 |
| 公開(公告)號: | CN101629215A | 公開(公告)日: | 2010-01-20 |
| 發明(設計)人: | 曹廣文;李淑華;劉世建;常文軍;張宏偉 | 申請(專利權)人: | 中國人民解放軍第二軍醫大學 |
| 主分類號: | C12Q1/70 | 分類號: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司: | 上海新天專利代理有限公司 | 代理人: | 王 巍 |
| 地址: | 200433*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 聯合 快速 檢測 流行性 腦炎 病毒 西尼羅 試劑盒 及其 方法 | ||
1、一種聯合快速檢測流行性乙型腦炎病毒、登革病毒和西尼羅病毒試劑盒,其特征在于所述試劑盒由主反應液和特異性引物組成:
所述主反應液的組成:10×等溫反應緩沖液、濃度為5U/μl的禽類成髓細胞瘤病毒反轉錄酶、濃度為40U/μl的核酸酶抑制劑、濃度為8U/μl的Bst?DNA聚合酶、濃度為10mM的dNTP、濃度為100mM的硫酸鎂、和濃度為5M的酣菜堿和1.25μl焦碳酸二乙脂處理水,總體積量為16μl;
所述特異性引物:包括特異性引物1,特異性引物2,特異性引物3;每組特異性引物都共有3對引物,它們分別為內引物1FIP和內引物2BIP;外引物1F3和外引物2B3;環引物1FLP和環引物2BLP。
2、根據權利要求1的試劑盒,其特征在于所述主反應液的組成為:2.5μl?10×等溫反應緩沖液、1.0μl禽類成髓細胞瘤病毒反轉錄酶5U/μl,0.25μl核酸酶抑制劑40U/μl,2.0μl?Bst?DNA聚合酶8U/μl,3.5μl?10mM?dNTP,1.5μl?100mM的硫酸鎂,4.0μl?5M的酣菜堿和1.25μl焦碳酸二乙脂處理水;總體積量為16μl。
3、根據權利要求2的試劑盒,其特征在于所述主反應液的10×等溫反應緩沖液為:濃度為200mM、pH值為8.8的三羥基甲基氨基甲烷鹽酸鹽、濃度為100mM的氯化鉀、濃度為100mM硫酸按、濃度為20mM的硫酸鎂和濃度為1%的曲拉通X-100。
4、根據權利要求1的試劑盒,其特征在于所述特異性引物1為特異性擴增乙腦病毒引物;特異性引物2為特異性擴增登革病毒引物;特異性引物3為特異性擴增西尼羅病毒引物;所述特異性引物2包括特異性擴增I型登革病毒引物、II型登革病毒引物、III型登革病毒引物,IV型登革病毒引物。
5、根據權利要求1的試劑盒,其特征在于所述特異性引物濃度分別如下:
所述乙腦病毒特異引物PJEV包括20μM內引物1PJEVFIP、20μM內引物2PJEVBIP、10μM外引物1PJEVF3、10μM外引物2PJEVB3,、20μM環引物1PJEVFLP和20μM環引物2PJEVBLP;
所述I型登革病毒引物PDV1包括20μM內引物1PDV1FIP、20μM內引物2PDV1BIP、10μM外引物1PDV1F3、10μM外引物2PDV1B3、20μM環引物1PDV1FLP、20μM環引物2PDV1BLP,總體積量為7μl;
所述II型登革病毒引物PDV2包括20μM內引物1PDV2FIP、20μM內引物2PDV2BIP、10μM外引物1PDV2F3、10μM外引物2PDV2B3、20μM環引物1PDV2FLP、20μM環引物2PDV2BLP,總體積量為7μl;
所述III型登革病毒引物PDV3包括20μM內引物1PDV3FIP、20μM內引物2PDV3BIP、10μM外引物1PDV3F3、10μM外引物2PDV3B3、20μM環引物1PDV3FLP、20μM環引物2PDV3BLP,總體積量為7μl;
所述IV型登革病毒引物PDV4包括20μM內引物1PDV4FIP、20μM內引物2PDV4BIP、10μM外引物1PDV4F3、10μM外引物2PDV4B3、20μM環引物1PDV4FLP、20μM環引物2PDV4BLP,總體積量為7μl;
所述西尼羅病毒特異引物PWNV包括20μM內引物1PWNVFIP、20μM內引物2PWNVBIP、10μM外引物1PWNV?F3、10μM外引物2PWNVB3、20μM環引物1PWNVFLP、20μM環引物2PWNVBLP,總體積量為7μl。
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