技術領域

本發明涉及對有機毒物、重金屬、農藥急性毒性的測試方法，具體涉及一種用敏感藻測試有毒有害物急性毒性的方法。屬于環境保護和食品安全監測等技術領域。

應用范圍：本方法適用于有機毒物、重金屬、農藥；電鍍廢水，生產甲醛的廢水，煉焦廢水，污染土壤農，污染飲用源水，污水廠污泥，污水廠出水等；福爾馬林泡發的毛肚、豬蹄筋、牛蹄筋、鴨腸、干魷魚、干海參、干墨魚等；施過農藥的西紅柿、黃瓜、花菜、大白菜、蓮花白、豇豆、新疆萄萄、草莓、櫻桃等急性毒性檢測。

背景技術

現有技術中，對電鍍廢水，生產甲醛的廢水，煉焦廢水，污染的土壤，污染飲用源水，污水廠污泥，污水廠出水等；福爾馬林泡發的毛肚、豬蹄筋、牛蹄筋、鴨腸、干魷魚、干海參、干墨魚等；施過農藥的西紅柿、黃瓜、花菜、大白菜、蓮花白、豇豆、新疆萄萄、草莓、櫻桃等物質含有的有機毒物、重金屬、農藥的急性毒性檢測，目前普遍采用發光細菌法進行檢測，其測試步驟是：a冰箱中取出發光細菌凍干粉稱取1g放入100ml蒸餾水中配成發光細菌液，并復蘇2～4小時；b將復蘇后的發光細菌液放入培養箱中在25℃進行恢復活力培養8小時取出；c在4個測試皿中分別加入5ml經恢復活力培養的發光細菌液，其中2個測試皿加0.05ml測試樣品，另外2個測試皿加0.05ml蒸餾水；d將處理好的4個測試皿放入熒光分析儀中，在20～25℃室溫下測試發光細菌的熒光變化強度，每1min測一次，直到熒光不在變化止；e用兩測試組熒光強度變化大小比較來確定測試樣品毒性大小。發光細菌法的特點是：測試靈敏度高，達到0.01～50mg·L-1，測試時間快，平均為5min；不足之處是不同發光細菌的發光本質不同，檢測時操作較繁瑣，測試儀器較重需要交流電源，發光細菌價格貴等。由此可知，發光細菌法存在重現性差、操作不便、不能現場測試、測試成本高等不足。

自然水體中的藻類具有采樣、分離、培養和保存容易等特點，因而在有關行業中應用越來越廣泛。根據不同藻類的特點，其用途各有不同。但是，目前有關運用操作簡便、測試迅速、儀器價廉攜帶方便、藻類取材容易成本低的藻類紅外輻射測試有毒有害物急性毒性尚未見國內外報道。不同藻種對有毒有害物急性毒性的藻紅外響應不同，只有對急性毒性具有特殊的藻紅外輻射響應的敏感藻可作為藻紅外測試技術中的測試藻。敏感藻是指對有毒有害毒物急性毒性的藻紅外輻射響應具有顯著性、靈敏性和專一性的藻類，顯著性指對急性毒性的響應溫差大、響應時間快，靈敏性指對有毒有害物的響應劑量小，專一性指對某類有毒有害毒物急性毒性的良好響應。但是，目前國內外尚未有關于自然水體藻測試有毒有害物急性毒性的報道，也無用紅外測溫儀測試微生物紅外輻射的報道。因此，經檢索未發現與本方法研究有關的最接近的對比文獻。

發明內容

針對現有技術存在的上述不足，本發明的目的在于提供一種操作方便、可現場測試、測試成本較低的用敏感藻測試有毒有害物急性毒性的方法。

敏感藻的準備：以羊角月牙藻(Selenastrum?capricornutum)作為有機毒物的敏感藻，短線脆桿藻(Fragilaria?brevistriata)作為重金屬的敏感藻，水華魚腥藻(Anabaenaflos-aquae)作為農藥的敏感藻；

對上述敏感藻的葉綠素a含量進行測定：分別測定上述敏感藻的葉綠素a含量≥4.0mg·L^-1時，培養藻液可用于毒性測試，即以葉綠素a含量≥4.0mg·L^-1作為測試藻量標準；

測試儀器準備：便攜式紅外測溫儀；分辨率≤0.1℃；

測試樣品的處理：取待測樣品稀釋，配制成×5、×10、×10²、×10³的稀釋液待用；

毒性測試：根據待測樣品的不同，選擇準備相應的敏感藻，在試驗組的三個容器中分別加入5ml所述藻液，待藻液溫度穩定時用紅外測溫儀對準藻液面中心測試并記錄所測溫度一次，然后用移液管取出待測樣品的稀釋液0.05ml加入上述藻液中，以后每1.5min測溫一次，直到溫度變化停止測溫記錄；如果藻液未響應則依次增加0.5ml稀釋液進行測試直到產生響應；同時，在對照組的三個容器中分別加入5ml所述藻液，在藻液中加入0.05ml蒸餾水，立即用前面的測試方法對兩組藻液進行測溫記錄，測試順序從毒物的低濃度向高濃度逐一進行；試驗組重復三次，對照組重復三次；測試順序從毒物的低濃度向高濃度逐一進行；當確定第一次響應濃度后，再將該濃度樣品液按×10²、×10或×5進行稀釋測試，測試順序從高向低稀釋倍數逐一進行；