[發明專利]還原型輔酶Q10的制備方法有效
| 申請號: | 200810063121.5 | 申請日: | 2008-07-17 |
| 公開(公告)號: | CN101307338A | 公開(公告)日: | 2008-11-19 |
| 發明(設計)人: | 任雷;任喬 | 申請(專利權)人: | 任雷;任喬 |
| 主分類號: | C12P7/26 | 分類號: | C12P7/26;C12R1/01;C12R1/645 |
| 代理公司: | 杭州豐禾專利事務所有限公司 | 代理人: | 王鵬舉 |
| 地址: | 312500浙江省*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 原型 輔酶 q10 制備 方法 | ||
1.還原型輔酶Q10的制備方法,其特征在于該方法包括以下的步驟:
一、氧化型輔酶Q10原料進行磷酸化
在37℃的條件下,將250克氧化型輔酶Q10溶解在1000毫升pH7.4的磷酸緩沖液中,按照氧化型輔酶Q10重量的5%加12.5克磷酸酯,攪拌30分鐘;
二、生物還原酶的制備
(1)選擇含有輔酶Q10的細菌或真菌放置在光照培養箱中培養72小時,所述的細菌為紅假單胞菌,所述真菌為粟酒裂殖酵母;
(2)收集培養液,用6000轉/分鐘的離心機離心20分鐘,離心后的菌體用超聲波細胞破碎機破碎,加入200毫升3%重量百分比濃度的鹽水靜置1小時;取上清液,加入500毫升的50%重量百分比濃度的硫酸銨沉淀;
(3)沉淀后在40℃水浴1.5小時,用冷凍離心機在1~3℃,12000轉/分鐘條件下離心20分鐘;棄上清,加入300毫升磷酸緩沖液透析,透析后加入100毫升Sepharose?4B攪拌,用200毫升磷酸緩沖液分三次清洗,加氫氧化鈉調pH8.5,解離;過濾后的液體用冷凍干燥機凍干,得所述的生物還原酶;
三、通過生物還原酶還原磷酸化的氧化型輔酶Q10
在37℃~60℃的條件下,將制備好的磷酸化氧化型輔酶Q10,加入反應器中,加入80mg制備的生物還原酶,攪拌10~30分鐘;
四、提取還原反應物中的還原型輔酶Q10
采用0.5MPa,30℃條件下,膜壓過濾前述還原反應物,提取生成物,濾液放置2℃中5小時以上;濾過液在35℃,200Pa的真空度條件下進行真空濃縮,濃縮物加入1000ml水洗3次,在2℃條件下結晶,冷凍干燥結晶物,即得到所述還原型輔酶Q10。?
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