【技術(shù)領(lǐng)域】：本發(fā)明屬于生物及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及利用乳酸乳球菌治療尿毒癥。具體是馴化乳酸乳球菌，使其具備轉(zhuǎn)化尿素能力的方法。

本發(fā)明涉及的馴化菌可以簡單、有效地去除模擬尿毒癥患者胃腸道中的尿素，從而達(dá)到減少患者體內(nèi)尿素累積，治療尿毒癥的目的。

【背景技術(shù)】：尿毒癥(uremia)，從字面意義上看，意味著血尿，最早是由Piorry教授用來描述腎衰竭的臨床癥狀。尿毒癥是與水鹽、電解質(zhì)、激素紊亂和機(jī)體代謝異常密切相關(guān)的臨床綜合癥，并且與腎功能衰退同時發(fā)生。尿毒癥主要是由慢性腎衰(CRF)、慢性腎病(ARF)或者嚴(yán)重的大面積急性腎衰竭引起的。

腎臟由上100萬個極小的過濾單位所組成，主要功能包括過濾和排泄新陳代謝后的廢物和多余的水分，調(diào)節(jié)水、鹽、酸堿、離子平衡，制造紅血球生長激素，調(diào)節(jié)活性維生素D及控制血壓。許多原發(fā)性或繼發(fā)性腎臟疾病患是腎結(jié)構(gòu)和功能遭到損害，最終導(dǎo)致急性或慢性腎功能衰竭。其中慢性腎功能衰竭是一種漸進(jìn)發(fā)展的疾患，其后果是引起一系列代謝紊亂和臨床癥狀所組成的綜合癥。

尿毒癥：即腎衰晚期，當(dāng)腎功能衰竭進(jìn)一步發(fā)展，殘存的腎小球?yàn)V過率僅為正常的10％以下，殘存腎單位＜10％，內(nèi)生肌酐清除率＜10ml/min，血肌酐＞442μmol/L(5mg/dL)，血尿素氮＞21.4mmol/L(60mg/dL)，即出現(xiàn)明顯的尿毒癥(uremia)癥候群，表現(xiàn)為全身多臟器功能衰竭，臨床可表現(xiàn)為惡心嘔吐、煩躁不安、血壓增高、心慌、胸悶、不能平臥、呼吸困難、嚴(yán)重貧血、抽搐，嚴(yán)重者昏迷，以及水中毒、高血鉀等電解質(zhì)紊亂和代謝性酸中毒等，需要依靠透析維持生命。?？梢蚋哐?、腦水腫、肺水腫、心功能衰竭而突然死亡。

尿毒癥毒素學(xué)說認(rèn)為，新陳代謝是維持生命的基本保障，而人體的腎臟在這種保障中起著不可替代的作用。因各種病因所造成的腎功能與結(jié)構(gòu)的損傷，使得某些在正常情況下原本可以通過腎臟排泄的毒素在體內(nèi)產(chǎn)生積累，造成了機(jī)體的一系列病理改變，甚至危及生命，這些物質(zhì)就是所謂的尿毒癥毒素。目前已經(jīng)知道的尿毒癥患者體液內(nèi)約有200多種物質(zhì)的濃度比正常人高，其中一些代謝產(chǎn)物經(jīng)動物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察證明是有毒的，可引起尿毒癥的某些癥狀。

目前還沒有查出某一種尿毒癥毒素可以單獨(dú)的引起所有尿毒癥癥狀。各種尿毒癥毒素，包括尿素、甲狀旁腺激素(PTH)、β2球蛋白和聚多胺等都和尿毒癥的臨床癥狀有關(guān)。腎衰會引起很高的發(fā)病率和住院率，和高血壓、冠心病、外周血管病變并列為四大疾病。

尿素(Urea)是最早被認(rèn)定的一種尿毒癥毒素，在體內(nèi)的積蓄會引起一系列中毒癥狀，如疲勞，嘔吐，嗜睡，頭痛，皮膚瘙癢及出血。一直以來臨床上把尿素作為尿毒癥毒素的清除目標(biāo)。對尿毒癥的現(xiàn)有主要治療手段主要包括手術(shù)治療和血液凈化療法，即腎移植、腹膜透析和血液透析等。血液透析方法經(jīng)過幾十年的發(fā)展，技術(shù)成熟，療效顯著，但是治療費(fèi)用昂貴，很多患者得不到治療。

口服制劑治療尿毒癥是近年來發(fā)展的一條新路?？靠诜幕瘜W(xué)吸附材料和離子交換材料，在患者消化道中吸收尿毒癥毒素。氧化淀粉是最早用于治療尿毒癥的口服吸附材料，口服后與腸腔中尿素結(jié)合從糞便中排出，以減輕氮質(zhì)血癥。其中口服包醛氧化淀粉5～10g，每日2～3次，有一定治療效果。缺點(diǎn)是：藥量過大，服用不便，并且不能與堿性藥物合用，否則會降低藥效。

近年研究的新型口服制劑是工程化的大腸桿菌。轉(zhuǎn)化了脲酶基因Klebsiella?aerogenes的大腸桿菌Escherichia?coli?DH5，可以在大鼠腎衰模型中轉(zhuǎn)化尿素。但是，Escherichia?coli是條件致病菌，在應(yīng)用時需要對細(xì)菌進(jìn)行微囊化處理，轉(zhuǎn)化尿素的能力不高，對胃腸環(huán)境的適應(yīng)性較差。因此，為了能滿足實(shí)際臨床應(yīng)用的需要，急需開發(fā)出能清除尿素、吸收尿素代謝產(chǎn)物、適應(yīng)胃腸道環(huán)境、并且對人體安全無害的食用菌。

【發(fā)明內(nèi)容】：本發(fā)明目的是提供一種具有轉(zhuǎn)化尿素效能的乳酸乳球菌及其馴化的方法，使乳酸乳球菌能夠轉(zhuǎn)化尿素。

本發(fā)明的方法是尿素加壓馴化，逐漸減少尿素之外的氮源，培養(yǎng)出能利用尿素、以尿素為氮源的工程菌。提高馴化菌的尿素轉(zhuǎn)化活性，并且測試馴化菌在模擬胃腸環(huán)境中的生長和活性。為今后研發(fā)用于臨床治療的生物制劑、實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化打好基礎(chǔ)。