[發明專利]Vero細胞裂解蛋白、制備方法及其用途有效
| 申請號: | 200810043319.7 | 申請日: | 2008-04-30 |
| 公開(公告)號: | CN101570566A | 公開(公告)日: | 2009-11-04 |
| 發明(設計)人: | 史晉;施松明;姚越;劉毅 | 申請(專利權)人: | 上海澤潤生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C07K1/16 | 分類號: | C07K1/16;C07K1/34;G01N33/68 |
| 代理公司: | 上海天翔知識產權代理有限公司 | 代理人: | 王 裕;呂 伴 |
| 地址: | 201203上海市浦東*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | vero 細胞 裂解 蛋白 制備 方法 及其 用途 | ||
1.一種制備Vero細胞裂解蛋白的方法,包括下述步驟:
a)Vero細胞培養、收獲;
b)細胞破碎裂解;
c)Vero細胞裂解蛋白的純化;
d)濃縮處理:將收集液先經用MWCO=100KD的超濾膜濃縮,再用MWCO=100KD的超濾離心管濃縮,即為Vero細胞裂解蛋白;
所述純化包括粗純化和精純化步驟;所述精純化步驟為粗純化后樣品用MWCO=100KD膜超濾,經疏水柱純化、分子篩層析,收集所需的目的蛋白,所述目的蛋白的收集蛋白峰范圍與疫苗生成工藝中病毒及其成分收集峰相同;所述疏水柱純化為Phenyl?Sepharose?6FF疏水純化,上樣緩沖液流速為30~60cm/h,后以pH值6.0~7.5的1.0mol/L?PB溶液淋洗3管柱體積,pH6.0~7.5的0.02mol/L?PB溶液線性洗脫5管柱體積,收集電導值低于48mS/cm的洗脫液,所述分子篩層析為Sepharose?4?Fast?Flow型分子篩凝膠層析,用pH7.4?0.01mol/L?PBS溶液以45cm/h的流速進行洗脫,收集第二洗脫峰。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于所述細胞破碎裂解為細胞化學裂解、滲透破碎、反復凍融、細胞酶裂解、超聲波破碎或細胞機械裂解。
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于所述細胞破碎裂解為超聲波破碎。
4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于所述粗純化方法為有機溶劑抽提法。
5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于所述有機溶劑抽提法為破碎后的細胞液加入與其等體積的三氯甲烷,振搖20分鐘,以4000rpm的速度2~8℃離心20分鐘,吸取上層蛋白水相。
6.根據權利要求1所述的方法,其特征在于所述病毒及其成分為甲型肝炎病毒及其成分。
7.按照權利要求1-6任一項方法所制備的Vero細胞裂解蛋白。
8.根據權利要求7所述的Vero細胞裂解蛋白,其特征在于所述的Vero細胞裂解蛋白為蛋白混合物,分子量范圍為11KD、17~34KD、55KD、72KD~170KD。?
9.權利要求7所述的Vero細胞裂解蛋白在制備Vero細胞HCP檢測試劑中的用途。?
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