技術領域

本發明屬于生物農藥領域，具體涉及一株真菌Xylaria?sp.FDYS-1及其制備的生物制劑與在防治松材線蟲中的應用。

背景技術

松材線蟲病是松樹的一種毀滅性病害。該病通常來勢兇猛，染病松樹死亡率極高，被稱為“森林的癌癥”和“無煙的森林火災”。我國自1982年在南京中山陵首次發現該病，現已蔓延至江蘇、浙江、安徽、山東、湖北、廣東、江西、重慶、貴州等12個省份的113個縣(區)，發生面積超過73hm²，死亡松樹200萬株，造成林業經濟、森林生態的巨大損失和自然景觀的嚴重破壞，并對我國廣大適生區的松林構成嚴重威脅。

目前對松材線蟲病的防治主要針對其傳媒昆蟲和松材線蟲本身，而當前研究的松材線蟲控制因子主要包括產毒真菌、抗生素和殺蟲植物等。在產毒真菌方面，孫建華報道總狀共頭霉(Syncephalastrumracemosurn)對松材線蟲有極強的殺線蟲活性。向紅瓊等發現用乙酸乙酯從粗皮側耳麥粒培養物中提取的粗毒素，對松材線蟲有較強的毒性。李國紅等發現一種側耳屬(Pleurotus?sp.)真菌，12h內對松材線蟲的致病率可達90％以上，且其活性組分存在于發酵液中，不需誘導能穩定生成，水溶性，對熱不敏感。張克勤等發現Pseudohalonectriaadversaria?ZD1菌株通過液體和麥粒固體培養后，可從代謝產物中提取有效的水溶和脂溶性物質制備成殺線蟲生物毒素；Caryosporacallicarpa?ZD2菌株通過液體和固體發酵后，可制備成對松材線蟲具毒殺活性的生物制劑。董錦艷等發現粉紅粘帚霉(Gliocladium?roseum)Gr87菌株采用常規固體發酵及提取分離的方法，可以獲得6種對松材線蟲有毒殺活性的化合物，這些化合物可單獨或組合制備殺線蟲生物農藥。可見，尋找對松材線蟲有毒性作用的真菌已經逐漸成為研究的熱點。

使君子是傳統的殺蟲藥用植物，自身能產生殺蟲成分，基于植物內生真菌能產生與其宿主相同或相似的活性成分這一觀點，如果以使君子植物內生真菌為篩選對象，應該可以獲得對松材線蟲有毒殺活性的菌株，從而為線蟲的生物防治奠定基礎，目前尚未有相關報道。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種具殺線蟲活性的真菌Xylaria?sp.FDYS-1。

本發明的另一個目的在于提供由上述真菌Xylaria?sp.FDYS-1的代謝產物制備而得的生物制劑，該生物制劑具有較高的松材線蟲致死活性。

本發明的另一個目的在于提供上述生物制劑的制備方法。

本發明的另一個目的在于提供上述真菌Xylaria?sp.FDYS-1及其代謝產物在松材線蟲防治中的應用。

本發明的上述目的是通過如下方案予以實現的：

真菌Xylaria?sp.FDYS-1分離自廣州華南植物園栽培的使君子(Quisqualis?indica?L.)健康葉片，該菌為子囊菌中炭角菌屬(Xylariasp.)的菌株FDYS-1，在PDA培養基上菌落為純白色，輻射狀，表面稍有褶疊，未見產孢結構，菌株的ITS序列與GenBank中登陸號為EF423534.1的Xylaria?sp.同源性達99％，菌株Xylaria?sp.FDYS-1已于2008年1月25日在中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號為CCTCC?NO：M?208025。

一種生物制劑，是由殺線蟲活性菌株Xylaria?sp.FDYS-1經液體發酵后提取制備而得，其制備方法為：將Xylaria?sp.FDYS-1接種至pH為5～8的液體培養基，于26℃～29℃無光照條件下120r/min振蕩培養3～5天，將含菌絲的發酵液放入離心管中，離心過濾除去菌絲，收集濾液即得。

上述液體培養基為馬鈴薯葡萄糖液體培養基(PD)或馬鈴薯蔗糖液體培養基(PS)。

實驗證明：上述生物制劑對松材線蟲有毒殺活性，對線蟲的致死率可達99％，且經121℃處理20min也不失活；真菌Xylaria?sp.FDYS-1產生毒殺松材線蟲的活性物質的能力基本保持遺傳穩定，連續繼代6代后對線蟲的致死率仍達90.43％。

因此，本發明的真菌Xylaria?sp.FDYS-1及其代謝產物(如上述的由發酵培養液制備的生物制劑)可用于松材線蟲的防治。