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[發明專利]一種制備微生物絮凝劑的方法有效

專利信息
申請號: 200810012572.6 申請日: 2008-07-31
公開(公告)號: CN101327975A 公開(公告)日: 2008-12-24
發明(設計)人: 胡筱敏;董怡華;李亮;姜彬慧;付忠田;葉舒帆;朱茂森;尚進 申請(專利權)人: 東北大學
主分類號: C02F1/52 分類號: C02F1/52
代理公司: 沈陽東大專利代理有限公司 代理人: 梁焱
地址: 110004遼寧省*** 國省代碼: 遼寧;21
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 制備 微生物 絮凝 方法
【權利要求書】:

1.?一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于:采用戴爾福特食酸菌作為制備微生物絮凝劑的菌種來源,通過以下步驟制備微生物絮凝劑:(1)液體培養基的制備;(2)菌種的發酵培養:將戴爾福特食酸菌菌株接種到種子培養器中制備種子培養液,然后接種到發酵罐中制備戴爾福特食酸菌發酵液;(3)絮凝劑粗制品的制備:將戴爾福特食酸菌發酵液稀釋后離心分離,然后經過蒸發濃縮、加入乙醇獲得絮凝沉淀物,將絮凝沉淀物經離心分離和真空干燥制備成絮凝劑粗制品;(4)絮凝劑精制品的制備:將絮凝劑粗制品溶解于無菌水中,獲得絮凝劑粗制品溶解液,然后加入有機溶液經室溫振蕩和分層后,將上清液進行透析,將透析后的透析內液加入乙醇產生絮凝沉淀物,將絮凝沉淀物離心后干燥,制備成微生物絮凝劑精制品。

2.?根據權利要求1所述一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的液體培養基:液體培養基配制按可溶性淀粉5~20克,NaNO31~10克,K2HPO40.5~5克,MgSO4·7H2O?0.1~20克,KCl?0.1~2克放入1000mL蒸餾水中,調節pH=5.0~9.0配制。

3.?根據權利要求1所述一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的菌種的發酵培養:將液體培養基進行高壓蒸汽滅菌,然后放入經過滅菌的種子培養容器中,接種戴爾福特食酸菌菌株,在20~40℃,120~180r/min的條件下培養10~15h,獲得戴爾福特食酸菌種子培養液;將戴爾福特食酸菌種子培養液接種于裝有液體培養基的發酵罐中進行攪拌發酵,接種按種子培養液體積占液體培養基體積的10~20%,發酵溫度為25~35℃,鼓入空氣攪拌,鼓入空氣量為0.5~1.0L/min,電機攪拌速度為140~160r/min,培養15~50h,獲得戴爾福特食酸菌發酵液。

4.?根據權利要求1所述一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的絮凝劑粗制品的制備:在戴爾福特食酸菌發酵液中加入2~10倍體積的蒸餾水稀釋,在室溫和轉速為70r/min條件下攪拌2h以上,然后在5000~8000r/min條件下離心分離10~30min去除菌體;將離心分離后的液體在40~60℃條件下蒸發濃縮至0.5倍原體積;將濃縮后的液體在4℃條件下預冷1h以上,然后加入2~4倍體積無水冷乙醇,混合均勻后,在4℃條件下放置12h以上,將液體部分倒出,保留絮凝沉淀物;將獲得的液體部分加入質量濃度為80%的乙醇,靜置獲得絮凝沉淀物,將液體部分倒出,保留絮凝沉淀物;再于分離后的液體部分加入質量濃度為80%的乙醇,靜置獲得絮凝沉淀物,將液體部分倒出,保留絮凝沉淀物;收集三次獲得的絮凝沉淀物,以3000~6000r/min的速度離心10min,將離心后的固相真空干燥5~6h,獲得絮凝劑粗制品。

5.?根據權利要求1所述一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的絮凝劑精制品的制備:將絮凝劑粗制品溶解于無菌水中,獲得絮凝劑粗制品溶解液,溶解按質量比例為絮凝劑粗制品∶無菌水=1∶100,加入有機溶液,加入量按體積比為:絮凝劑粗制品溶解液∶有機溶液=1∶0.5~2,以120~160r/min的速度室溫振蕩12h以上,靜置分層,下層減壓蒸餾回收,上層液體在速度為3000~6000r/min的條件下離心10~30min,保存上清液,將固相溶解于無菌水中重復3次提取操作;收集上清液,將上清液裝入清洗后的透析袋里,用去離子水在40±2℃條件下透析24~60小時,透析完成后將透析袋內液體加入2~6倍體積的無水冷乙醇,靜置1h以上,產生絮凝沉淀物,然后以3000~6000r/min的速度離心10~30min,收集固相,真空干燥4~6h后,得到微生物絮凝劑精制品。

6.?根據權利要求3所述的一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于將戴爾福特食酸菌種子培養液接種于裝有液體培養基的發酵罐中進行攪拌發酵前,發酵罐經過空罐滅菌,裝入液體培養基后發酵罐再經過實罐滅菌。

7.?根據權利要求4或5所述的一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的真空干燥在溫度為60℃±2,真空度為0.06Mpa的條件下進行。

8.?根據權利要求5所述的一種制備微生物絮凝劑的方法,其特征在于所述的有機溶液為氯仿和正丁醇的混合液體,其成分按體積比為氯仿∶正丁醇=1.25~4∶1。

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