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[發明專利]紐激酶及其在治療心血管疾病中的用途無效

專利信息
申請號: 200710046356.9 申請日: 2007-09-25
公開(公告)號: CN101397551A 公開(公告)日: 2009-04-01
發明(設計)人: 周明東 申請(專利權)人: 上海澤生科技開發有限公司
主分類號: C12N9/12 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C07K16/40;C12Q1/48;A61K38/16;A61K38/45;A61K48/00;A61P9/00;A61P9/04;A61P9/10;C12Q1/04;C12Q1/68
代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 代理人: 趙蓉民
地址: 201203上海市浦*** 國省代碼: 上海;31
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 激酶 及其 治療 心血管疾病 中的 用途
【權利要求書】:

1.一種分離的蛋白質,其具有磷酸化調節性肌球蛋白輕鏈的活性,所述蛋白 質包括如下氨基酸序列:

(a)SEQ?ID?NO:7或8所示氨基酸序列;

(b)SEQ?ID?NO:6編碼的氨基酸序列;

(c)在(a)或(b)所示氨基酸序列中有一個或幾個氨基酸添加、缺失或置換的 序列,條件是所述蛋白質仍然具有所述活性;

(d)與(a)、(b)或(c)中所述氨基酸序列至少有70%序列相同性的氨基酸序列, 條件是所述蛋白質仍然具有所述活性。

2.權利要求1所述蛋白質的編碼核酸或者該編碼序列中至少10個連續核 苷酸的反義序列。

3.一種構建物,所述構建物包含啟動子和1-10個拷貝的權利要求2所述 的蛋白質的編碼核酸或該編碼序列中至少10個連續核苷酸的反義序列。

4.一種表達載體,其包含權利要求2所述的蛋白質的編碼核酸或反義序列 或權利要求3所述的構建物。

5.一種用于表達權利要求1所述的蛋白質的宿主細胞。

6.權利要求1所述的蛋白質的特異性抗體。

7.體外篩選權利要求1所述蛋白質的促效劑或抑制劑的方法,所述方法包括:

(a)提供一ATP水解活力檢測體系;

(b)提供測試組、陰性對照組和陽性對照組,其中:

所述測試組為加入了測試物質和權利要求1所述的分離的蛋白質的所 述檢測體系;

所述陰性對照組為不含測試物質和權利要求1所述的分離的蛋白質的 所述檢測體系;

所述陽性對照組為不含測試物質但含有權利要求1所述的分離的蛋白 質的所述檢測體系,

(c)孵育后,觀察測試組中ATP水解能力變化,并與陰性和陽性對照組進 行比較;

其中,與對照組相比,測試組ATP水解能力降低,就表示測試物質是潛在 的權利要求1所述蛋白質的抑制劑;而測試組ATP水解能力提高,就表示測試 物質是潛在的權利要求1所述蛋白質的促效劑。

8.一種藥物組合物,其包含:

(i)有效量的活性物質,所述活性物質選自:

(a)權利要求1所述的蛋白質、權利要求2所述的編碼核酸、權利要求3 所述的構建物、或權利要求4所述的表達載體;

(b)通過權利要求7所述的方法篩選得到的權利要求1所述的蛋白質的促 效劑;或

(c)通過權利要求7所述的方法篩選得到的權利要求1所述的蛋白質的抑 制劑、權利要求2所述的編碼核酸的反義序列、或權利要求6所述特異性抗體;

(ii)藥學上可接受的載體。

9.權利要求1所述的蛋白質、其促效劑或其抑制劑在制備治療心臟病的藥 物中的用途。

10.體外檢測心肌細胞中權利要求1所述蛋白質和/或其基因存在異常的方 法,所述方法包括:

(a)提供相同數量的樣品心肌細胞和正常心肌細胞,其中所述的正常心肌細胞 為正常表達權利要求1所述蛋白質的心肌細胞;

(b)在步驟(a)后,用權利要求6所述的特異性抗體免疫沉淀裂解的樣品心肌 細胞和正常心肌細胞,然后測定沉淀的ATP水解活力,其中與正常心肌細胞相比, ATP水解活力發生變化,則表明樣品心肌細胞中權利要求1所述蛋白質存在異常; 或者

(b’)在步驟(a)后,提取樣品心肌細胞或正常心肌細胞的RNA,以對應權利要 求1所述蛋白質編碼序列的5’端或3’端的序列為引物,做實時PCR后定量比較和/ 或PCR擴增后測序比較,樣品心肌細胞的測試結果與正常心肌細胞的測試結果存在 變化,則表明樣品心肌細胞中權利要求1所述蛋白質的基因存在異常。

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