[發明專利]紐激酶及其在治療心血管疾病中的用途無效
| 申請號: | 200710046356.9 | 申請日: | 2007-09-25 |
| 公開(公告)號: | CN101397551A | 公開(公告)日: | 2009-04-01 |
| 發明(設計)人: | 周明東 | 申請(專利權)人: | 上海澤生科技開發有限公司 |
| 主分類號: | C12N9/12 | 分類號: | C12N9/12;C12N15/54;C07K16/40;C12Q1/48;A61K38/16;A61K38/45;A61K48/00;A61P9/00;A61P9/04;A61P9/10;C12Q1/04;C12Q1/68 |
| 代理公司: | 北京紀凱知識產權代理有限公司 | 代理人: | 趙蓉民 |
| 地址: | 201203上海市浦*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 激酶 及其 治療 心血管疾病 中的 用途 | ||
1.一種分離的蛋白質,其具有磷酸化調節性肌球蛋白輕鏈的活性,所述蛋白 質包括如下氨基酸序列:
(a)SEQ?ID?NO:7或8所示氨基酸序列;
(b)SEQ?ID?NO:6編碼的氨基酸序列;
(c)在(a)或(b)所示氨基酸序列中有一個或幾個氨基酸添加、缺失或置換的 序列,條件是所述蛋白質仍然具有所述活性;
(d)與(a)、(b)或(c)中所述氨基酸序列至少有70%序列相同性的氨基酸序列, 條件是所述蛋白質仍然具有所述活性。
2.權利要求1所述蛋白質的編碼核酸或者該編碼序列中至少10個連續核 苷酸的反義序列。
3.一種構建物,所述構建物包含啟動子和1-10個拷貝的權利要求2所述 的蛋白質的編碼核酸或該編碼序列中至少10個連續核苷酸的反義序列。
4.一種表達載體,其包含權利要求2所述的蛋白質的編碼核酸或反義序列 或權利要求3所述的構建物。
5.一種用于表達權利要求1所述的蛋白質的宿主細胞。
6.權利要求1所述的蛋白質的特異性抗體。
7.體外篩選權利要求1所述蛋白質的促效劑或抑制劑的方法,所述方法包括:
(a)提供一ATP水解活力檢測體系;
(b)提供測試組、陰性對照組和陽性對照組,其中:
所述測試組為加入了測試物質和權利要求1所述的分離的蛋白質的所 述檢測體系;
所述陰性對照組為不含測試物質和權利要求1所述的分離的蛋白質的 所述檢測體系;
所述陽性對照組為不含測試物質但含有權利要求1所述的分離的蛋白 質的所述檢測體系,
(c)孵育后,觀察測試組中ATP水解能力變化,并與陰性和陽性對照組進 行比較;
其中,與對照組相比,測試組ATP水解能力降低,就表示測試物質是潛在 的權利要求1所述蛋白質的抑制劑;而測試組ATP水解能力提高,就表示測試 物質是潛在的權利要求1所述蛋白質的促效劑。
8.一種藥物組合物,其包含:
(i)有效量的活性物質,所述活性物質選自:
(a)權利要求1所述的蛋白質、權利要求2所述的編碼核酸、權利要求3 所述的構建物、或權利要求4所述的表達載體;
(b)通過權利要求7所述的方法篩選得到的權利要求1所述的蛋白質的促 效劑;或
(c)通過權利要求7所述的方法篩選得到的權利要求1所述的蛋白質的抑 制劑、權利要求2所述的編碼核酸的反義序列、或權利要求6所述特異性抗體;
(ii)藥學上可接受的載體。
9.權利要求1所述的蛋白質、其促效劑或其抑制劑在制備治療心臟病的藥 物中的用途。
10.體外檢測心肌細胞中權利要求1所述蛋白質和/或其基因存在異常的方 法,所述方法包括:
(a)提供相同數量的樣品心肌細胞和正常心肌細胞,其中所述的正常心肌細胞 為正常表達權利要求1所述蛋白質的心肌細胞;
(b)在步驟(a)后,用權利要求6所述的特異性抗體免疫沉淀裂解的樣品心肌 細胞和正常心肌細胞,然后測定沉淀的ATP水解活力,其中與正常心肌細胞相比, ATP水解活力發生變化,則表明樣品心肌細胞中權利要求1所述蛋白質存在異常; 或者
(b’)在步驟(a)后,提取樣品心肌細胞或正常心肌細胞的RNA,以對應權利要 求1所述蛋白質編碼序列的5’端或3’端的序列為引物,做實時PCR后定量比較和/ 或PCR擴增后測序比較,樣品心肌細胞的測試結果與正常心肌細胞的測試結果存在 變化,則表明樣品心肌細胞中權利要求1所述蛋白質的基因存在異常。
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