技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種膽固醇代謝調(diào)控蛋白， 所述蛋白可制備調(diào)節(jié)膽固醇代謝的藥物或作為篩選調(diào)節(jié)膽固醇藥物的靶點。

背景技術(shù)

體內(nèi)高水平膽固醇如高膽固醇血癥可直接導(dǎo)致動脈粥樣硬化，是中風(fēng)和冠 心病的主因；老年癡呆癥、肥胖癥、糖尿病等的發(fā)生也與膽固醇代謝紊亂密切 相關(guān)。隨著人們飲食結(jié)構(gòu)變化及社會老齡化，膽固醇代謝紊亂引起的心血管病、 老年癡呆癥等的發(fā)生越來越多，迫切需要研發(fā)調(diào)節(jié)膽固醇代謝的藥物。

膽固醇是一種重要的甾醇類分子，廣泛存在于生物界，它是生物膜的關(guān)鍵 組分，同時也是膽汁酸、甾醇類激素和一些維生素合成的唯一前體，并參與了 許多重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。膽固醇代謝異常會直接導(dǎo)致嚴(yán)重疾病的發(fā)生，如： 動脈粥樣硬化(是心血管疾病、中風(fēng)的主因)、阿爾海默氏疾病及膽結(jié)石等。因 此研究膽固醇的代謝平衡具有重要的科學(xué)意義和廣泛的醫(yī)用價值。

細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成，是以乙酰輔酶A為原料，經(jīng)過約30步連續(xù)的酶促 反應(yīng)最終合成膽固醇。這一過程受到嚴(yán)格的調(diào)控，其中主要的限速反應(yīng)是由羥 甲基戊二酰輔酶A(HMG?CoA)至甲羥戊酸(Mevalonate)這一步，催化這一反應(yīng)的 是羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG?CoA?reductase，HMGCR)。羥甲基戊二酰輔 酶A還原酶在多種水平上受到細(xì)胞內(nèi)膽固醇的反饋調(diào)控，在轉(zhuǎn)錄水平，轉(zhuǎn)錄因 子膽固醇調(diào)節(jié)序列結(jié)合蛋白(Sterol?regulation?element?binding?protein， SREBP)調(diào)控羥甲基戊二酰輔酶A還原酶基因的啟動子活性；在蛋白水平，甾醇 促進(jìn)羥甲基戊二酰輔酶A還原酶降解而減少自身膽固醇的合成。宋保亮博士等 研究發(fā)現(xiàn)，甾醇調(diào)控的羥甲基戊二酰輔酶A還原酶降解是通過泛素-蛋白酶體 途徑；鑒定出膽固醇合成中間體Lanosterol是特異性促進(jìn)羥甲基戊二酰輔酶A 還原酶蛋白降解的內(nèi)源調(diào)節(jié)小分子；并發(fā)現(xiàn)了該降解途徑特異的泛素連接酶 gp78和降解關(guān)鍵蛋白VCP。

綜上可見，膽固醇的合成是一個復(fù)雜的途徑，盡管對該途徑已經(jīng)有了一定 的了解，然而還有必要進(jìn)行進(jìn)一步的研究，從而找到膽固醇代謝調(diào)節(jié)的良好靶 點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種膽固醇代謝調(diào)控蛋白——泛素融合降解蛋白1 (Ubiquitin?fusion?degradation1，Ufd1)及其應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供泛素融合降解蛋白1(Ufd1)或其拮抗劑或激動 劑的用途，用于制備調(diào)節(jié)膽固醇代謝的制劑或組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的泛素融合降解蛋白1選自：

(1)SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列的蛋白；或

(2)將SEQ?ID?NO：1所示氨基酸序列經(jīng)過一個或多個氨基酸殘基的取代、 缺失或添加而形成的，且具有調(diào)節(jié)細(xì)胞膽固醇代謝功能的由(1)衍生的蛋白。

在另一優(yōu)選例中，所述的泛素融合降解蛋白1是：(3)保留SEQ?ID?NO：1 中第258-275位氨基酸所示的gp78結(jié)合域的蛋白；和/或保留SEQ?ID?NO：1中 第92-93位氨基酸或SEQ?ID?NO：1中第81-85位氨基酸的蛋白。

在本發(fā)明的第二方面，提供一種篩選調(diào)節(jié)膽固醇代謝的物質(zhì)的方法，所述方 法包括步驟：

(a)將泛素融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互作用的體系和候選物質(zhì) 進(jìn)行接觸；

(b)觀察候選物質(zhì)對于泛素融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互作用的 影響；

其中，若所述候選物質(zhì)可促進(jìn)泛素融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互 作用，則表明該候選物質(zhì)是降低細(xì)胞膽固醇水平的潛在物質(zhì)；若所述候選物質(zhì) 可抑制泛素融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互作用，則表明該候選物質(zhì) 是提高細(xì)胞膽固醇水平的潛在物質(zhì)。

在另一優(yōu)選例中，步驟(a)包括：在測試組中，將候選物質(zhì)加入到泛素融合 降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互作用的體系中；和/或

步驟(b)包括：檢測測試組的體系中泛素融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78 相互作用，并與對照組比較，其中所述的對照組是不添加所述候選物質(zhì)的泛素 融合降解蛋白1與泛素連接酶gp78相互作用的體系；