[發明專利]高拷貝表達重組乙肝表面抗原的畢赤酵母及其制法和應用有效
| 申請號: | 200710041493.3 | 申請日: | 2007-05-31 |
| 公開(公告)號: | CN101314761A | 公開(公告)日: | 2008-12-03 |
| 發明(設計)人: | 何成;樓覺人 | 申請(專利權)人: | 上海生物制品研究所 |
| 主分類號: | C12N1/19 | 分類號: | C12N1/19;C12N15/12;C12N15/51;C12P21/02 |
| 代理公司: | 上海專利商標事務所有限公司 | 代理人: | 徐迅 |
| 地址: | 200052*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 拷貝 表達 重組 乙肝 表面抗原 酵母 及其 制法 應用 | ||
1.一種表達乙肝表面抗原的酵母細胞,其特征在于,所述酵母細胞的染 色體中整合有表達乙肝表面抗原的構建物,所述構建物含有2-15個串聯排列 的乙肝表面抗原表達盒,每個所述乙肝表面抗原表達盒包括以下元件:
(a)起始信號元件AOX;
(b)乙肝表面抗原基因,其序列如SEQ?ID?NO:1所示;和
(c)終止信號元件AOX-TT;
并且所述酵母細胞在甲醇誘導下表達乙肝表面抗原,表達量至少為 30mg/L,并且所述的乙肝表面抗原在所述酵母中自行裝配成類病毒顆粒。
2.如權利要求1所述的表達乙肝表面抗原的酵母細胞,其特征在于,所 述酵母細胞選自:畢赤酵母、釀酒酵母或漢遜酵母。
3.如權利要求1所述的表達乙肝表面抗原的酵母細胞,其特征在于,所 述構建物是以pPIC3.5K質粒為基礎構建的。
4.如權利要求1所述的表達乙肝表面抗原的酵母細胞,其特征在于,在 所述乙肝表面抗原類病毒顆粒具有與天然病毒相近的抗原表位,且能刺激哺乳 動物免疫系統產生保護性中和抗體。
5.一種制備乙肝表面抗原類病毒顆粒的方法,其特征在于,所述方法包 括步驟:
(i)在適合表達的條件下,培養權利要求1所述的表達乙肝表面抗原的酵 母細胞,從而表達乙肝表面抗原;和
(ii)從培養物中分離出乙肝表面抗原類病毒顆粒。
6.一種乙肝表面抗原類病毒顆粒,其特征在于,所述類病毒顆粒是通過 權利要求5所述的方法制備的。
7.如權利要求6所述的類病毒顆粒的用途,其特征在于,用于制備預防或 治療乙肝的疫苗組合物。
8.一種構建物,其特征在于,所述構建物含有2-15個串聯排列的乙肝表 面抗原表達盒,每個所述乙肝表面抗原表達盒包括以下元件:
(a)起始信號元件AOX;
(b)乙肝表面抗原基因,其序列如SEQ?ID?NO:1所示;
(c)終止信號元件AOX-TT。
9.構建權利要求8所述的構建物的方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)將乙肝表面抗原基因定點插入包含起始信號元件AOX和終止信號元件 AOX-TT的質粒中,以獲得單拷貝表達質粒;
(2)對所述單拷貝表達質粒進行改造以獲得完整的乙肝表面抗原表達盒, 其中,所述表達盒包含:
(a)起始信號元件AOX;
(b)乙肝表面抗原基因,其序列如SEQ?ID?NO:1所示;
(c)終止信號元件AOX-TT;
(3)將所述乙肝表面抗原表達盒重復插入所述質粒中,從而獲得含有2-15 個串聯排列的乙肝表面抗原表達盒的構建物。
10.權利要求1所述的表達乙肝表面抗原的酵母細胞的制備方法,其特征 在于,所述方法包括步驟:用權利要求5所述的構建物轉化酵母細胞,使所述 的構建物整合入酵母染色體中,從而獲得權利要求1所述的表達乙肝表面抗原 的酵母細胞。
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