技術領域：

本發明涉及含有表皮細胞生長因子和堿性成纖維細胞生長因子的膠原蛋白海綿的制備方法。

背景技術：

1、在正常情況下，健康人的創傷愈合因子(細胞生長因子)顯得并不十分重要。但對患有多種慢性難愈合創面的患者來講，創傷愈合因子則顯神奇功效，因此這才是各種細胞生長因子的主要應用方向。

在患有某些疾病時，如糖尿病、動脈硬化、慢性靜脈擴張與阻塞、褥瘡、紅斑狼瘡、類風濕關節炎、老年人等，可能因代謝異常，局部或全身營養不足而造成創傷難以愈合。如糖尿病患者的腿足傷可長達幾年甚至幾十年不愈合。Knighton研究小組曾使用病人自體的血小板源創傷愈合因子(Platelet-derivedwound?healing?factor，PDWHF)，實際上是多種生長因子的混合物，治療難愈合的創傷，包括糖尿病人的腿足傷、褥瘡、動脈供血不足及靜脈回流不暢患者的潰瘍等。結果獲得預想不到的效果，治愈率達97％，平均治療時間為10.6周。接著又報道用PDWHF治療的19個病人中有14人痊愈，而給安慰劑的對照組12個病人8周后仍有9人未愈合。

某些治療措施也會引起創傷不愈癥，如接受化療、放療和類固醇治療的病人，因體內某些細胞受到抑制而失去分泌某些生長因子的作用，致使病人的創傷難以愈合。如接受皮質激素治療的病人，體內的巨噬細胞受到抑制，失去了分泌TGF-β的功能，因而影響創傷愈合，在這種情況下使用創傷愈合因子將更顯必要。

有些組織的損傷本來就較其它組織難以愈合，如角膜損傷、顱骨損傷等，這也是使用創傷愈合因子的首選病例之一。

2、隨著生長因子在臨床的應用，給這些難愈合創面的治療帶來了新的思路。表皮生長因子(EGF)是表皮細胞的有絲分裂原，能促進表皮細胞的分裂與增殖。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)能有效地促進成纖維細胞和血管內皮細胞的分裂與增殖。這兩種生長因子在創面愈合過程中起到非常重要的作用。此兩種生長因子的聯合使用在臨床治療上已獲可喜的效果。薛斌等人對58名有慢性難愈合創面的病人同時使用EGF和bFGF發現，聯合使用這兩種生長因子明顯促進傷口愈合。(薛斌等，中國臨床康復第8卷第2期2004-01-15)

3、EGF和bFGF等生長因子在創傷主動修復過程中的作用越來越廣泛地被人們認識，但大多數生長因子的活性在常溫下會迅速下降。作為液體藥劑使用時在傷口處又易流失。所以，在臨床使用時有諸多不便，不能充分發揮其療效。

發明內容：

本發明就是針對上述問題，提供一種促進慢性創面愈合并具有主動修復功能的含有生長因子的膠原蛋白海綿的制備方法。

本發明采用如下技術方案：

1、用動物的皮或結締組織生產膠原蛋白酶解液；

2、用表皮細胞生長因子和成纖維細胞生長因子分別加入膠原蛋白的酶解液中，表皮細胞生長因子的濃度為120IU/ml-250IU/ml，成纖維細胞生長因子的濃度為200AU/ml-350AU/ml；

3、將含有表皮細胞生長因子、成纖維細胞生長因子的膠原蛋白酶解液經真空冷凍干燥成海綿狀；

4、將含有表皮細胞生長因子和成纖維細胞生長因子的膠原蛋白海綿切割、包裝、鈷60照射滅菌。

發明的有益效果：

本發明在成纖維細胞生長因子膠原蛋白海綿的基礎上提供了一個表皮生長因子和成纖維細胞生長因子膠原蛋白海綿的新組合材料，這種新材料作為外科敷料對于傷口特別是慢性創口的愈合有促進作用。這種含主動修復活性的生物源敷料正在臨床上使用，效果明顯。

經實驗表明，由于本發明中使用的兩種因子主動修復功能的互補性，表皮細胞生長因子和成纖維細胞生長因子聯合使用制成膠原蛋白海綿在臨床應用上有更好的療效。尤其是對慢性難愈合創面的修復是其它創傷敷料所不能及的。

具體實施方式：

實施例1：

1、膠原蛋白酶解液的制取：