技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從植物中提取藥用活性成分的綠色化工生產(chǎn)方法，更具體涉及從枇杷葉中分離制備具有降血糖和抗癌功能的可工業(yè)化應(yīng)用的科羅索酸(corosolic?acid)的方法。

背景技術(shù)

科羅索酸(Corosolic?acid)屬于五環(huán)三萜酸類化合物，為熊果酸(Ursolic?acid)的衍生物。與熊果酸相比，科羅索酸2位碳上多了一個(gè)α羥基，通常又稱2α-羥基熊果酸。二者的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖分別如下：

科羅索酸(Corosolic?acid)的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

熊果酸(Ursolic?acid)的化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

近年研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大葉紫薇提取物具有降糖、降脂、抗腫瘤和抗氧化等功能，其降血糖的主要藥效成分為科羅索酸，但在大葉紫薇植物中科羅索酸的含量?jī)H0.01％，在大葉紫薇提取物中科羅索酸的含量也僅為1％左右，目前市售的保健品Glucosol所含科羅索酸的含量即為1％，由于科羅索酸在大葉紫薇植物中的低含量將在一定程度上限制其在醫(yī)療保健領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，中國(guó)專利ZL?200410064929.7，孫宏斌等報(bào)道了科羅索酸的化學(xué)合成制備方法。美國(guó)專利US?6485760和US?6716459分別報(bào)道了采用大葉紫薇提取物降血糖的方法和配方。

近現(xiàn)代藥理藥效學(xué)研究表明，科羅索酸可通過(guò)興奮葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)通道，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收和利用，具有降血糖的功效(Murakami等，Chem.Pharm.Bull.1993，41，2129；Miura等，Bio.Pharm.Bull.2004，27，1103)。科羅索酸對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的興奮作用類似于胰島素，因此，科羅索酸也被稱為“植物胰島素”。除了降血糖和減肥功能外，科羅索酸還具有抗炎、抗癌和抑制脫氧核糖核酸聚合酶活性等作用。作為防治肥胖癥和II型糖尿病新藥，科羅索酸在美國(guó)FDA已進(jìn)入III臨床藥效學(xué)研究。

中國(guó)是世界上最主要的枇杷生產(chǎn)國(guó)，枇杷栽培面積和產(chǎn)量約占全球的2/3以上，福建莆田是中國(guó)枇杷的主產(chǎn)區(qū)(為福建省枇杷葉GAP藥材基地)，現(xiàn)有枇杷種植面積16萬(wàn)畝，可年產(chǎn)枇杷葉5萬(wàn)多噸。

枇杷葉系薔薇科植物枇杷[Eriobotrya?japonica(Thunb.)Lindl.]的葉子，為藥食同源的傳統(tǒng)中藥材，有止咳平喘、清肺和胃、降氣化痰的功效，收載于歷版中國(guó)藥典。枇杷葉富含科羅索酸(0.4～1.25)、熊果酸(1.0～2.0％)和齊墩果酸(Oleanolic?acid)等三萜酸類物質(zhì)，枇杷葉中的熊果酸和科羅索酸含量在迄今發(fā)現(xiàn)的所有植物中位居前茅，綜合利用中國(guó)豐富的枇杷葉資源制備熊果酸和科羅索酸具有十分重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

國(guó)內(nèi)已有多個(gè)研究者對(duì)枇杷葉中三萜酸及其熊果酸進(jìn)行了分離純化，但國(guó)外尚未見報(bào)道。中國(guó)專利申請(qǐng)200710008809.9，陳劍鋒等報(bào)道了從枇杷葉中分離純化熊果酸的方法，中國(guó)公開專利CN?1943647A，陳劍鋒等報(bào)道了一種枇杷葉三萜酸提取物的制備方法。但枇杷葉中科羅索酸的分離純化尚未成熟，僅陳龍勝等考察了溶劑萃取條件對(duì)科羅索酸提取率的影響(陳龍勝等，林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，26(3)，110)。

由于科羅索酸、熊果酸和齊墩果酸等三萜酸類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)復(fù)雜，人工合成困難，國(guó)內(nèi)外均自中草藥或植物中提取。科羅索酸純品為白色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)242～244℃，無(wú)臭，無(wú)味，可溶于甲醇、乙醇等極性有機(jī)溶劑，微溶于氯仿、乙醚等脂溶性溶劑，不溶于石油醚和水中。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從枇杷葉中分離制備科羅索酸的方法，包括枇杷葉總?cè)扑岬姆蛛x制備、科羅索酸的樹脂富集純化和科羅索酸的結(jié)晶純化等步驟。該制備方法采用親水性有機(jī)溶劑提取、堿性除雜、活性炭脫色、大孔吸附樹脂富集純化，親水性有機(jī)溶劑結(jié)晶和重結(jié)晶處理等一系列分離純化集成技術(shù)，從枇杷葉中制備高純度科羅索酸晶體，不僅制備工藝簡(jiǎn)單、分離純化效率高、容易工業(yè)化生產(chǎn)，而且制備的科羅索酸純度高、生產(chǎn)成本低。

本發(fā)明的從枇杷葉中分離制備科羅索酸的方法包括枇杷葉總?cè)扑岬姆蛛x制備、科羅索酸的樹脂富集純化和科羅索酸的結(jié)晶純化步驟，其特征在于：采用親水性有機(jī)溶劑水溶液提取枇杷葉總?cè)扑幔趬A性條件下，趁熱過(guò)濾除雜和活性炭脫色，提取液經(jīng)減壓回收部分溶劑、調(diào)整pH值、調(diào)整有機(jī)溶劑濃度和總?cè)扑釢舛群螅捎么罂孜綐渲患兓屏_索酸，冷卻結(jié)晶、冷藏、靜置養(yǎng)晶、過(guò)濾，得科羅索酸粗品。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)是：