[發(fā)明專利]突變體Ⅱ型β-內(nèi)酰胺酰化酶有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200680050115.5 | 申請日: | 2006-12-28 |
| 公開(公告)號: | CN101351549A | 公開(公告)日: | 2009-01-21 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 簡·米特斯卡·拉恩凡德;理查德·克爾曼;威廉·比杰勒威爾德;比昂卡·吉艾勒森 | 申請(專利權(quán))人: | 帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司 |
| 主分類號: | C12N9/80 | 分類號: | C12N9/80 |
| 代理公司: | 北京東方億思知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 | 代理人: | 肖善強(qiáng) |
| 地址: | 荷蘭*** | 國省代碼: | 荷蘭;NL |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 突變體 內(nèi)酰胺 酰化酶 | ||
1.突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶,其是具有II型β-內(nèi)酰胺酰化酶活性的 模型多肽的變體,其中,
所述突變體β-內(nèi)酰胺酰化酶較之具有β-內(nèi)酰胺酰化酶活性的所述模型 多肽而言,針對己二酰-7-ADCA的體外β-內(nèi)酰胺酰化酶活性提高了至少 1.5倍,以及,
其中,所述突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶通過用選自L161T、 L161S+E442G、L161S+H589R、L161G、L161G+E10K、L161S、L161T、 L161T+S29N、L161T+S29N+H274L、L161T+H274L、L161T+I314V、 L161T+V726I、L161T+Y706G、L161T+Y706G+S29N、 L161T+S29N+P514Q、L161T+S29N+H274L+I314Q+N694T、 L161T+S29N+R280Q+I314V+A645T+V726I、 L161T+S29F+H274L+V726I、L161T+H274I+R280Q+I314V、 L161T+H274L+R589H、L161T+H274C+Y760G或 L161S+H274T+R280Q+R514Q+V726I的突變來修飾SEQ?ID?NO:1而獲 得,其中采用了SEQ?ID?NO:1所示的Pseudomonas的SE83-acyII酰化酶的 氨基酸序列的氨基酸位置編號,以及
其中,所述模型多肽是SEQ?ID?NO:1所示的Pseudomonas的SE83- acyII酰化酶。
2.編碼權(quán)利要求1所述的突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶的多核苷酸。
3.包含權(quán)利要求2所述的多核苷酸的表達(dá)載體或表達(dá)盒。
4.經(jīng)權(quán)利要求2所述的多核苷酸或權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體或表達(dá) 盒轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
5.生產(chǎn)權(quán)利要求1所述的突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶的工藝,所述工 藝包括在有益于生產(chǎn)突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶的條件下培養(yǎng)如權(quán)利要求 4所述的宿主細(xì)胞的步驟,以及可選地,回收所述多肽的步驟。
6.生產(chǎn)脫酰基化β-內(nèi)酰胺化合物的工藝,所述工藝包括使用權(quán)利要求 1所述的突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶對β-內(nèi)酰胺化合物的酰化前體進(jìn)行脫 酰基化的步驟。
7.如權(quán)利要求6所述的工藝,其中,所述脫酰基化β-內(nèi)酰胺化合物是 6-APA、7-ACA、7-ADCA、7-ADAC或7-氨基-3-氨基甲酰氧甲基-3-頭孢霉 素核-4-羧酸。
8.如權(quán)利要求6或7所述的工藝,其中,所述β-內(nèi)酰胺化合物的酰化 前體具有以二羧酸為酰基基元的酰基。
9.如權(quán)利要求6或7所述的工藝,其中,所述突變體II型β-內(nèi)酰胺酰 化酶以被固定的形式使用。
10.如權(quán)利要求1所述的突變體II型β-內(nèi)酰胺酰化酶用于對β-內(nèi)酰胺 化合物的酰化前體進(jìn)行脫酰基化的用途。
11.如權(quán)利要求10所述的用途,其中所述β-內(nèi)酰胺化合物是7-ADCA 或7-ACA。
12.如權(quán)利要求10或11所述的用途,其中,所述β-內(nèi)酰胺化合物的 酰化前體具有以二羧酸為酰基基元的酰基。
13.權(quán)利要求10或11所述的用途,其中,所述突變體II型β-內(nèi)酰胺 酰化酶以被固定的形式使用。
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