發明領域：

本發明大體上涉及用于確定血小板抑制百分比的方法和設備，更具體地，涉及在用抑制血小板各種活化途徑的藥物進行處理時用于測定血小板抑制百分比的方法和設備。

背景技術：

血小板在哺乳動物生理上的作用是非常多樣的，但是它們的主要作用是止血。在許多情況下，希望評估血液凝結的能力，這是一個經常受血小板粘附和/或凝聚的能力控制的參數。因此，人們關心的是評估血小板的粘附功能。例如，感興趣的問題包括是否施用阻止或促進凝塊形成的藥物，或者是否在外科手術進行之前檢測血小板的功能缺陷。同樣感興趣的是評估被作為新藥測試或者批準在患者中臨床治療使用的血小板抑制劑的有效性。

血小板在保持正常止血中發揮關鍵作用。當暴露于受損的血管時，血小板會粘附到暴露的皮下基質。在初始粘附之后，在受傷位置釋放或產生各種因子，例如凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)和膠原，活化血小板。一旦血小板被活化，血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受體將發生構象變化，允許它與纖維蛋白原和/或von?Willebrand因子結合。正是由于相鄰血小板上的GPIIb/IIIa受體與多價纖維蛋白原和/或von?Willebrand因子分子的結合，導致額外的血小板補充到受損位置并且凝聚，從而形成止血栓或血栓。

血小板凝聚是用于描述血小板彼此結合的術語。體外血小板凝聚測定是用于評估血小板在體內形成產生初級止血栓的凝聚體的能力的實驗室方法。在這一技術中，抗凝全血樣品在多重條件下離心，同時產生富血小板血漿(PRP)和貧血小板血漿(PPP)樣品。然后，向PRP添加凝集劑，如ADP或膠原，與此同時，光學監視血小板的凝聚，用PPP樣品進行單獨的光學測量。然后，使用PPP通道作為100％凝聚參照水平，與PRP通道進行比較，確定凝聚百分比。因為血液離心會導致紅血細胞溶血，所以由于制備差異導致的PPP光密度變化會使用于計算凝聚百分比的光學參照水平產生誤差。

在實驗室中用于評估體內血小板凝聚能力的另一種體外血小板凝聚測定方法，使用稀釋的全血測量在添加了凝集劑，如ADP或膠原，后血小板粘附和凝聚時，兩個緊密間隔貴金屬電極之間的電阻抗變化。利用這種方法，不能用單個測定裝置確定血小板凝聚百分比。相反，必須執行兩個單獨的測定，獲取兩個測量結果的比率以確定凝聚百分比。對于患者已經應用血小板抑制藥物的情況，無法確定其血小板凝聚百分比。目前測量血小板凝聚的測定方法價格昂貴、費時、笨拙，且一般不適合于臨床環境。

最近，美國專利號5,763,199開發并描述了一種快速血小板功能測定方法。該測定方法確定非稀釋全血中的糖蛋白(GP)IIb/IIIa受體阻斷(blockade)。當球珠與含有血小板的全血接觸時，導致涂布有GPIIb/IIIa配體如纖維蛋白原的小聚合體球珠凝集，所述血小板上帶有已活化的未阻斷GPIIb/IIIa受體。凝集失敗表明GPIIb/IIIa受體激活失敗和/或GPIIb/IIIa受體阻斷失敗。在優選實施方案中，添加血小板活化劑，如ADP或花生四烯酸，使測定能夠足夠快速和方便地在床邊執行，并且若激活受體沒有被阻斷時，使小聚合體球珠在一個方便的、已知的時期內凝集。該測定方法包括能夠將待測試血液從收集容器轉移到測定設備，而無需打開收集容器。

血小板凝聚在血栓癥和急性冠狀動脈疾病病理中發揮關鍵作用。有證據表明，在響應各種抗血小板藥劑時，血小板功能存在顯著的變異性。還已經證實，當使用P2Y12拮抗藥如氯吡格雷(clopidogrel)治療患者以獲得抗凝聚效果時，血小板凝聚存在個體差異。一項研究的結果證實，至少有10％的接受藥物的患者不會獲得預期的血小板凝聚抑制(Muller?I，Besta?F，SchulzC，Massberg?S，Schonig?A，Gawaz?M；Prevalence?of?clopidogrel?non-respondersamong?patients?with?stable?angina?pectoris?scheduled?for?elective?coronary?stentplacemen?Thromb?Haemost.2003?May，89(5)：783-7)。

由于許多患有心血管疾病的患者長期服用某一種噻吩并吡啶制劑，因此用于基于對被抑制樣品進行單次測量確定血小板抑制水平的方法是有利的。此外，正在進行PTCA治療的患者在治療之前一般會給予大劑量的噻吩并吡啶制劑。這些患者中的一部分之后可能需要急診手術，且能夠提供有關其血小板抑制絕對水平信息的測定對于在手術之前評估出血處理風險是有利的。