本發明提供了編碼ptsH基因的核苷酸序列，及用棒狀細菌經發酵制備L-氨基酸，尤其L-賴氨酸的方法，其中棒狀細菌中ptsH基因是增強的。

L-氨基酸，尤其L-賴氨酸，用于人的內服藥及制藥工業，但尤為用于動物營養。

已知L-氨基酸可通過棒狀細菌菌株，尤其谷氨酸棒桿菌的發酵而生產，由于L-氨基酸的極其重要性，已持續進行改良生產方法的嘗試。生產方法的改良可涉及發酵措施。如攪拌和供氧，或營養培養基的組分如發酵期間的糖濃度，或產物形式的加工方法，例如通過離子交換層析，或微生物本身的固有生產性質。

為改良這些微生物的生產性質，可使用誘變，選擇及突變體選擇等方法，以此方法可獲得對抗代謝物如賴氨酸類似物S-(2-氨乙基)-半胱氨酸有抗性或重要的調節氨基酸缺陷的并產生L-賴氨酸的菌株。

-段時間以來，重組DNA技術的方法也用于棒狀細菌生產L-氨基酸的菌株改良，其通過增強各個L-氨基酸生物合成基因，并研究對L-氨基酸生產的作用而進行改良。此方面的綜述文章見Kinoshita(“谷氨酸細菌”，工業微生物的生物學，Demain和Soloman編輯，Benjamin?Cummings，英國倫敦，1985,115-142),Hilliger(生物技術2,40-44(1991)),Eggeling(氨基酸6:261-272(1994)),Jetten和Sinskey(生物技術的關鍵回顧15,73-103(1995))，及Sahm等(紐約科學協會年報782,25-39(1996))。

本發明人目的在于為改良L-氨基酸，尤其L-賴氨酸的生產而提供新措施。

L-氨基酸，尤其L-賴氨酸用于人用藥物及制藥工業，特別是動物營養。因此提供生產L-氨基酸，尤其L-賴氨酸的新改良方法總是令人感興趣的。

當下文提及L-賴氨酸或賴氨酸時，不僅指堿，也指鹽，如賴氨酸單鹽酸鹽或賴氨酸硫酸鹽。

本發明提供了衍生自棒狀細菌的分離的多核苷酸，其含有選自如下一組的多核苷酸序列：

a)與編碼含有SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸至少70％相同的多核苷酸，

b)編碼含有與SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的多核苷酸，

c)與a)、b)或c)的多核苷酸互補的多核苷酸，以及

d)含有a)、b)或c)的多核苷酸序列的至少15個連續核苷酸的多核苷酸。

本發明還提供了一種多核苷酸，其優選是DNA，并能在棒狀細菌中復制。

本發明還提供了一種是RNA的多核苷酸。

本發明還提供了一種優選地是能復制的DNA的多核苷酸，含有

(ⅰ)SEQ?ID?NO:1的核苷酸序列，或

(ⅱ)在遺傳密碼簡并范圍內相應于(ⅰ)序列的至少一個序列，或

(ⅲ)與互補于(ⅰ)或(ⅱ)序列的序列雜交的至少一個序列，和任選地

(ⅳ)(ⅰ)中有功能的中性有義突變。

本發明還提供了

含有上述一種多核苷酸的載體，以及作為宿主細胞的棒狀細菌，其含有該載體。

本發明還提供了多核苷酸，其基本上含有一多核苷酸序列，其可通過用含有所述多核苷酸序列的相應于SEQ?ID?NO:1或其片段的探針雜交相應的基因文庫，并分離所述的DNA序列來篩選獲得，所述文庫包括具有相應于SEQ?ID?NO:1的多核苷酸序列的完整基因。

本發明的多核苷酸序列適用作RNA,cDNA和DNA的雜交探針，以分離編碼磷酸轉移酶系統組分H的全長cDNA，以及分離與磷酸轉移酶系統組分H基因具有高度序列相似性的cDNA或基因。

本發明的多核苷酸序列還適用作通過聚合酶鏈反應(PCR)制備編碼磷酸轉移酶系統組分H的基因DNA的引物。

作為探針或引物的這種寡核苷酸包括至少30個，優選至少20個，特別優選至少15個連續核苷酸。具有至少40個或50個核苷酸的寡核苷酸也是合適的。

“分離的”是指從其天然環境中分離出來。

“多核苷酸”一般地涉及多聚核糖核苷酸和多聚脫氧核糖核苷酸，其可以是非修飾的RNA或DNA，或修飾的RNA或DNA。

“多肽”應理解為包括經肽鍵結合的兩個或多個氨基酸的肽或蛋白質。

本發明的多肽包括SEQ?ID?NO:2的多肽，以及具有磷酸轉移酶系統組分H活性的多肽，以及與SEQ?ID?NO:2的多肽至少70％相同的多肽，優選地與SEQ?ID?NO:2的多肽80％，特別是90-95％相同并具有所述活性的多肽。